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![杜鵑花屬植物的RAPD標(biāo)記研究.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-2/24/12/42233ef4-c732-4c50-9c81-8a6407312673/42233ef4-c732-4c50-9c81-8a64073126731.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究對(duì)RAPD-PCR的反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化,并利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù),對(duì)24種杜鵑花屬(Rhododendron)植物進(jìn)行基因組多態(tài)性分析。共篩選了60個(gè)隨機(jī)引物,其中4個(gè)隨機(jī)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性明顯,獲得清晰重復(fù)性好的條帶。在NTSYS-pc軟件中,統(tǒng)計(jì)擴(kuò)增產(chǎn)物條帶數(shù),用來(lái)計(jì)算Jaccard遺傳相似系數(shù)和遺傳距離,建立UMPGA聚類(lèi)分析圖。結(jié)果表明:1.獲得較好的反應(yīng)程序和反應(yīng)體系為:反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性1mi
2、n;94℃變性1min;34℃退火1min;72℃延伸2min;45個(gè)循環(huán);72℃延伸5min;4℃保存?! 》磻?yīng)體系(20μl反應(yīng)體系)為:模板DNA(10ng/μl)1.5μl;10×PCRbuffer2μl;Taq酶(0.5U/μl)0.3μl;Primer(0.8Pmol/μl)4μl;MgCl2(25mmol/L)1.8μl;dNTPs(dATP、dCTP、dTTP、dGTP各含1.0Nmol/μl)0.6μl。2.隨機(jī)引物
3、P15、U7、U10和X3四個(gè)引物對(duì)24種杜鵑花屬(RhododendronL.)植物擴(kuò)增的條帶在10~15之間,多態(tài)性條帶在9~14條之間,平均每條引物擴(kuò)增出12條帶;引物U10是擴(kuò)增出多態(tài)性最多的引物,多態(tài)性占93.33%。3.用4個(gè)隨機(jī)引物對(duì)24種杜鵑花屬植物進(jìn)行RAPD擴(kuò)增,所得產(chǎn)物顯示了豐富的多態(tài)性,表明杜鵑花屬植物種間遺傳基礎(chǔ)相當(dāng)復(fù)雜;對(duì)RAPD產(chǎn)物進(jìn)行統(tǒng)計(jì)的相似系數(shù)分析和聚類(lèi)分析結(jié)果同形態(tài)分類(lèi)學(xué)基本吻合,說(shuō)明RAPD技術(shù)在
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