1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　一、抑制PARP-1及iNOS表達(dá)在大鼠心肌梗死后心功能保護(hù)中的作用研究
　　目的：
　　1.探討PARP1、iNOS對(duì)大鼠心肌梗死后心臟結(jié)構(gòu)及功能的影響;
　　2.探討PARP1、iNOS的抑制劑對(duì)大鼠心肌梗死后心功能的保護(hù)作用;
　　3.進(jìn)一步探討PARP1、iNOS的抑制劑對(duì)心梗后心功能保護(hù)作用的可能分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.動(dòng)物分組及藥物處置

2、　　每組10只雄性Wistar大鼠，麻醉后給予冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎，造成心梗模型，根據(jù)分組分別給予不同的抑制劑腹腔注射。分為假手術(shù)對(duì)照組（Control）、心梗手術(shù)組(MI)、PARP抑制劑組(DPQ)、iNOS抑制劑組(1400W)共四組。
　　2.監(jiān)測(cè)各組大鼠基本指標(biāo)
　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程中于造模前及處死前后各測(cè)1次心率、體重、血壓。
　　3.超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)心臟結(jié)構(gòu)與功能
　　分別在術(shù)后3天、2周和4周時(shí)麻醉大鼠，應(yīng)用

3、小動(dòng)物經(jīng)胸2維超聲采集心功能各項(xiàng)指標(biāo)，重點(diǎn)測(cè)量反應(yīng)左室收縮功能的指標(biāo):左室收縮末期內(nèi)徑(ESD)、左室舒張末內(nèi)徑(EDD)、縮短分?jǐn)?shù)(FS)=((EDD-ESD)/EDD)×100，取多次測(cè)量多組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)統(tǒng)計(jì)。
　　4.Caspase活性檢測(cè)
　　選取凋亡相關(guān)的Caspase因子進(jìn)一步評(píng)價(jià)心梗相關(guān)區(qū)域的心肌細(xì)胞凋亡，參照Caspase-3因子的活性試劑盒使用說(shuō)明測(cè)定反應(yīng)后吸光光密度值反應(yīng)活性大小。
　　5.活性性氧

4、及其產(chǎn)物測(cè)定
　　購(gòu)買(mǎi)DHE染色試劑盒，按照染色步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材后石蠟切片進(jìn)行DHE探針標(biāo)記細(xì)胞中超氧陰離子的產(chǎn)生。
　　6.免疫組織化學(xué)染色
　　取心肌組織石蠟切片，分別免疫組化檢測(cè)左室心肌組織PAR因子、3-硝基酪氨酸(3-NT)及vWF因子的表達(dá)，并進(jìn)行綜合分析。
　　7.實(shí)時(shí)定量RT-PCR基因水平檢測(cè)
　　取-80℃凍存的心肌組織，Trizol法提取心肌組織總RNA，實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)

5、各指標(biāo)的表達(dá)水平。
　　8.Western blot檢測(cè)
　　取-80℃保存的心肌組織，提取總蛋白，Western-Blot檢測(cè)左室心肌組織內(nèi)裂解的Caspase3片段、裂解的PARP片段以及與血管發(fā)生相關(guān)的因子vWF等的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠的一般情況比較
　　整個(gè)實(shí)驗(yàn)中共死亡5只，最終35只大鼠完成實(shí)驗(yàn)。其中，Control組10只;MI組7只;MI+ DPQ組9只;MI+1400W組9只

6、。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，各組大鼠心率、體重和血壓均無(wú)差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組與對(duì)照組比較，體重?zé)o明顯下降(P＞0.05);心梗后心率、血壓升高(P＜0.05)，而藥物干預(yù)后的兩組與對(duì)照組比較，心率、血壓升高程度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2.超聲測(cè)量心臟結(jié)構(gòu)和功能指標(biāo)的變化
　　MI組與對(duì)照組比較，LVIDs及LVIDd均顯著擴(kuò)大(P＜0.05);藥物干預(yù)后的兩組與MI組比較，LVIDs及LVIDd均明顯減小(P

7、＜0.05)。MI組與對(duì)照組比較，F(xiàn)S、LVEF均不同程度降低(P＜0.05);藥物干預(yù)后的兩組與MI組比較，F(xiàn)S、LVEF均不同程度升高(P＜0.05)。
　　3.TUNEL染色觀察PARP抑制劑(DPQ)和iNOS抑制劑(1400W)對(duì)梗死心肌組織細(xì)胞凋亡發(fā)生率的影響.
　　4.PARP抑制劑(DPQ)和iNOS抑制劑(1400W)對(duì)Caspase活性的影響。
　　5.PARP1、iNOS抑制劑組大鼠PARP和iN

8、OS的表達(dá)減少。
　　6.PARP和iNOS抑制劑組大鼠缺血梗死心肌組織損傷性活性氧及其產(chǎn)物硝基酪氨酸的表達(dá)降低。
　　7.PARP和iNOS抑制劑組大鼠梗死相關(guān)區(qū)域的新生血管vWF表達(dá)增加。
　　結(jié)論：
　　1.PARP和iNOS的過(guò)度激活與心肌細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)密切相關(guān)， DPQ和1400W可以有效的抑制心肌缺血壞死誘發(fā)的PARP和iNOS的激活。
　　2.PARP和iNOS抑制劑能夠減少凋亡相關(guān)因子的

9、表達(dá)，能夠減少缺血部位的過(guò)氧化亞硝酸鹽的產(chǎn)生，抑制過(guò)氧化反應(yīng)，從而減少細(xì)胞凋亡，減輕炎癥反應(yīng)，增加新生血管，保護(hù)心臟功能。
　　3.PARP抑制劑和iNOS抑制劑可降低心梗大鼠左室收縮末內(nèi)徑(LVIDs)及左室舒張末內(nèi)徑((LVIDd)，提高縮短分?jǐn)?shù)(FS)，顯示PARP抑制劑和iNOS抑制劑明顯改善心梗大鼠心室重構(gòu)，改善心臟功能。
　　二、PARP-1和iNOS的表達(dá)水平與心功能不全評(píng)價(jià)指標(biāo)的相關(guān)性研究
　　目的：<

10、br>　　基于PARP-1及iNOS的產(chǎn)生和生物學(xué)功能的研究基礎(chǔ)，我們著重觀察了它們與心衰患者嚴(yán)重程度的臨床評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)之間的相關(guān)性的關(guān)系，進(jìn)一步驗(yàn)證其在心衰進(jìn)展中的作用。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象及選擇
　　選取2011年2月至2013年8月期間山東大學(xué)第二醫(yī)院心臟內(nèi)科住院治療的心功能不全患者，臨床評(píng)價(jià)其心功能為NYHAⅡ-V級(jí)，經(jīng)心臟彩超測(cè)定左室射血分?jǐn)?shù)＜50％，或免疫檢測(cè)血BNP＞100ng/ml。對(duì)照組（n=3

11、2例）為心功能正常人群，無(wú)心功能不全癥狀，臨床檢測(cè)左室射血分?jǐn)?shù)＞50％且血BNP＜100ng/ml。
　　2.各指標(biāo)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)
　　記錄所納入患者的性別、年齡、體重、身高;測(cè)量心率、血壓等;入院前服用地高辛、ACEI/ARB、β受體阻滯劑及利尿劑等口服藥物情況。入院后均予以檢測(cè)血常規(guī)、肝腎功能、血糖、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平，行心電圖、心臟彩

12、超、胸片等相關(guān)檢查，檢測(cè)BNP、CRP、ESR、心肌酶等。
　　研究對(duì)象血壓測(cè)定方法為:清晨醒來(lái)后在未進(jìn)行任何肢體活動(dòng)前測(cè)量左上臂血壓，每日測(cè)定1次，取測(cè)得收縮壓(SBP)平均值作為血壓指標(biāo);按照體重(kg)/身高(m)2計(jì)算體重指數(shù)(BMI)。
　　心臟超聲心動(dòng)圖的測(cè)定由有經(jīng)驗(yàn)的超聲醫(yī)師完成，選擇胸骨旁左心長(zhǎng)軸切面測(cè)量EDD、ESD，、LVEF、LA、MRA。取連續(xù)3個(gè)心動(dòng)周期所測(cè)量的各結(jié)果的平均值為研究數(shù)據(jù)。
　　

13、3.實(shí)驗(yàn)方法
　　(1)周?chē)o脈血血漿的分離保存:采集各研究對(duì)象清晨空腹時(shí)肘靜脈血3ml，注入枸櫞酸鈉(EDTA)抗凝的血液收集器內(nèi)，低溫離心吸取上清，分裝于EP管快速凍存于-80℃冰箱。
　　(2)白細(xì)胞的分離:清晨采集靜脈血于抗凝管內(nèi)，人外周血白細(xì)胞分離液分離后常溫離心，微量取樣器吸出第二層白細(xì)胞富集層，緩沖液清洗后快凍存于-80℃保存。
　　(3)血漿內(nèi)BNP的檢測(cè)步驟（酶聯(lián)免疫吸附法）:血漿BNP的測(cè)定使用雙抗

14、體夾心ELISA法測(cè)定。
　　(4)細(xì)胞中PARP-1及iNOS蛋白表達(dá)的檢測(cè)采用Weston-blot法。
　　(5)細(xì)胞中PARP-1及iNOS基因表達(dá)的檢測(cè)采用RT-PCR檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.臨床檢測(cè)指標(biāo)對(duì)比顯示，與對(duì)照組相比，心功能不全患者與對(duì)照組之間體重指數(shù)(BMI)、血紅蛋白、心率、血糖、血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)等指標(biāo)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05），而血壓(SBP)水平在

15、心功能不全(Ⅳ級(jí))組較對(duì)照組減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.各組間心臟彩超及BNP檢測(cè)結(jié)果與心功能不全分級(jí)的關(guān)系:與對(duì)照組相比，心功能不全患者EDD、ESD及LVEF等心臟彩超檢測(cè)數(shù)值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且LVEF明顯降低(P＜0.05); BNP濃度明顯升高(P＜0.05)。其中LVEF與心功能不全的相關(guān)系數(shù)R2=0.9676(P＜0.01)，BNP濃度與心功能不全的相關(guān)系數(shù)R2=0.8796(P＜0.01)。

16、r>　　3.不同組PARP1及iNOS基因表達(dá)與心功能不全分級(jí)的關(guān)系:心功能不全組（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組）PARP1及iNOS基因表達(dá)明顯升高(P＜0.05); PARP1基因相對(duì)表達(dá)與心功能分級(jí)之間呈正相關(guān)(R2=0.7919,P＜0.05);iNOS基因相對(duì)表達(dá)與心功能分級(jí)之間也呈正相關(guān)（R2=0.6737,P＜0.05）。
　　4.不同組白細(xì)胞內(nèi)PARP1及iNOS蛋白水平與心功能不全分級(jí)的關(guān)系:與對(duì)照組相比，心功能不全組（Ⅱ、Ⅲ、

17、Ⅳ組）PARP1及iNOS蛋白相對(duì)表達(dá)明顯升高(P＜0.05);PARP1及iNOS相對(duì)蛋白表達(dá)與心功能分級(jí)之間呈正相關(guān)(R2=0.973, R2=0.7696, P＜0.05)。
　　5.各組PARP1及iNOS表達(dá)與LVEF的相關(guān)性分析:不管是基因還是白細(xì)胞內(nèi)蛋白水平的相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)，均提示PARP1及iNOS表達(dá)均與LVEF水平呈明顯負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　6.各組PARP1及iNOS表達(dá)與BNP的相關(guān)性分析:不

18、同組PARP1及iNOS相對(duì)表達(dá)量與BNP的濃度之間呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.無(wú)論基因水平還是蛋白質(zhì)水平的結(jié)果提示:心功能不全患者血中PARP-1及iNOS表達(dá)水平較健康人群表達(dá)量均顯著升高。
　　2.PARP-1及iNOS表達(dá)水平升高與心功能不全的分級(jí)有顯著的正相關(guān)性;且與BNP表達(dá)水平呈正相關(guān)，與心臟彩超測(cè)定的心功能呈負(fù)相關(guān)。
　　3.PARP-1及iNOS的表達(dá)水平升高參與心衰的發(fā)生，