1、目的:中醫(yī)“證”是疾病發(fā)生過程中不同階段病因病機的高度概括,既然同一證有共同的臨床表現(xiàn)和病理機制,那么其肯定有共同的物質(zhì)基礎(chǔ),而這種物質(zhì)基礎(chǔ)很有可能反應(yīng)在基因或蛋白水平上。腎所藏之精稟受于父母,是構(gòu)成胚胎發(fā)育的原始物質(zhì),其與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)描述的遺傳物質(zhì)(DNA)具有一定的同一性。而基因又要在表達相應(yīng)蛋白質(zhì)的情況下才能影響生物的功能。蛋白組學(xué)是研究在生命體或細胞的整體水平研究蛋白質(zhì)的表達和修飾狀態(tài),以及蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用,從而確定人體的功

2、能蛋白并闡明其在細胞中的功能與相互關(guān)系,揭示生命活動的本質(zhì)。
　　 腎陰虛證和腎陽虛證是中醫(yī)學(xué)的基本證候,歷代醫(yī)家對腎陰虛證和腎陽虛證的理論與防治研究都頗為重視。腎陰虛證和腎陽虛證作為疾病的某一階段的主要矛盾,必然受到“病”這一基本矛盾的影響。正是由于不同疾病的特異性,決定了不同疾病相同證侯之間的差異；而同一疾病不同中醫(yī)證侯之間也存在差異。只有通過對這些差異的研究,進而歸納出證的一般規(guī)律,才有可能對腎陰虛證和腎陽虛證有更全面的解

3、析。因此,“病證結(jié)合”是研究腎陰虛證和腎陽虛證差異蛋白表達的重要思路。
　　 本研究采取“病證結(jié)合”的方法,以IgA腎病和亞健康狀態(tài)的腎陰虛證和腎陽虛證為研究對象,對其各種細胞因子靶蛋白進行抗體芯片表達譜的比較研究,篩選腎陰虛證、腎陽虛證相關(guān)蛋白的改變,通過細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面的研究,結(jié)合前期試驗結(jié)果,尋找主要的細胞因子改變,為確定中醫(yī)腎虛證證候客觀化指標(biāo)提供依據(jù)。
　　 方法:1、采用“病證結(jié)合”的方法,選取確診為IgA

4、腎病和亞健康狀態(tài)的腎陰虛證和腎陽虛證患者,作為實驗組；選擇健康志愿者作為正常對照組。
　　 2、收集樣本,制備樣品,運用生物素直接標(biāo)記技術(shù),檢測出多種細胞因子的表達水平,研究腎陰虛證和腎陽虛證的細胞因子改變。
　　 結(jié)果:1、腎陰虛證組與正常對照組比較,獲得差異表達蛋白共25條,其中表達水平上調(diào)的有2條(BMP5、TIMP4),表達水平下調(diào)的有23條(OSM、CXCR4、GCG、CXCR1、CTLA-4、Siglec-9

5、、CCR7、IL-17A、IL-17F、TRADD、IGFBP-6、THBS2、IL-4R、HGFR、IL-RA、Osteoactivine、MMP10、M-CSF R、G—CSF R、CNTF、IL-17C、TGFβ2、FGF23)。這些差異表達的蛋白按功能分析進行大體分類,主要涉及到免疫失調(diào)、新陳代謝、蛋白質(zhì)生物合成、氧化應(yīng)激、損傷修復(fù)、細胞凋亡、細胞信號傳導(dǎo)有關(guān)等方面。腎陰虛證差異表達蛋白的異常變化,與中醫(yī)腎陰虛證所表現(xiàn)的五心煩熱

6、、潮熱盜汗、腰膝酸軟、頭暈?zāi)垦?、易感外邪、精神萎靡、反?yīng)遲鈍等癥狀相符。
　　 2、腎陽虛證組與正常對照組比較,獲得差異表達蛋白共14條(Csk、BMP5、Frizzled1、Frizzled4、BDNF、CXCR3、LBP、LTBP1、IL-27RA、M-CSF、L-13RαⅡ、PECAM-1、Activin RⅡ A、FGF R5),表達水平均上調(diào)。主要涉及到免疫應(yīng)答、新陳代謝、細胞凋亡、細胞黏附、損傷修復(fù)、氧化應(yīng)激、生殖能

7、力等方面。腎陽虛證差異表達蛋白的異常變化,與中醫(yī)腎陽虛證所表現(xiàn)的腰膝酸軟、發(fā)脫齒松、耳鳴耳聾、反應(yīng)遲鈍、手足發(fā)冷、性欲減退,男子陽痿早泄,女子宮寒不孕等癥狀相符。
　　 3、腎陽虛證與腎陰虛證比較,共獲得差異表達蛋白1條(BMP5),表達水平上調(diào)。主要涉及細胞凋亡、骨的合成等方面。中醫(yī)認為,腎藏精,主人體的生長、發(fā)育和生殖,在體合骨,生髓。此共同蛋白的改變與中醫(yī)理論相符。
　　 4、中醫(yī)認為:腎藏精,主人體的生長、發(fā)育和

8、生殖,腎主水,主納氣,在體合骨,生髓。腎精氣盛衰是機體生、長、壯、老、已的基石,同時又是人體全身陰陽的根本。通過比較分析,我們發(fā)現(xiàn)腎陰虛證與腎陽虛證存在明顯的靶蛋白改變,主要涉及到免疫失調(diào)、新陳代謝、細胞周期、骨骼發(fā)育、DNA修復(fù)、蛋白質(zhì)的合成、生殖能力、神經(jīng)營養(yǎng)、造血功能等方面的功能,與中醫(yī)基本理論相符。
　　 結(jié)論:1、腎陰虛證與腎陽虛證差異表達蛋白存在明顯不同,提示腎陰虛證與腎陽虛證有著各自不同的蛋白表達譜,這是符合中醫(yī)理