1、本文以中華鳑鮍(Rhodeus sinensis)為研究對(duì)象,利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)中華鳑鮍3個(gè)自然群體(河北省磁縣東伍仕水庫(kù)群體、河南省安陽(yáng)市彰武水庫(kù)群體和河南省信陽(yáng)商城縣鲇魚山水庫(kù)群體)的遺傳多樣性進(jìn)行分析,了解中華鳑鮍的遺傳多樣性水平和遺傳結(jié)構(gòu),為其分類地位的甄別和其資源保護(hù)提供新的資料和科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)經(jīng)條件優(yōu)化,建立了中華鳑鮍ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系,10×Taq Buffer(Mg

2、2+)2.5μl、25mmol/L MgCl22μl、10mmol/L4×dNTP-mixture0.75μl、10mmol/L Primer1μl、5U/μl TaqDNA聚合酶0.15μl、50ng/μl模板1.5μl,最終加無(wú)菌的ddH2O至25μl。擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性5min,然后進(jìn)入38個(gè)循環(huán),即94℃變性40 sec,48℃-56℃(隨不同引物而定)退火40 sec,72℃延伸90 sec;最后72℃終延伸10min,4

3、℃保存。
　　 (2)篩選出12個(gè)引物,對(duì)中華鳑鮍3個(gè)群體共90尾中華鳑鮍基因組DNA進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增,共檢測(cè)到98個(gè)位點(diǎn),多態(tài)位點(diǎn)73個(gè),多態(tài)性比例為74.49％。利用POPGENE軟件分析3個(gè)中華鳑鮍群體的多態(tài)位點(diǎn)比例(PPB)、觀測(cè)等位基因數(shù)(Na)、有效等位基因數(shù)(Ne)、Nei's基因多樣度(h)、Shannon's信息指數(shù)(I)和遺傳距離(D)分別在51.58％～054.26％、1.3367～1.4796、1

4、.2368～1.3893、0.17660～0.3318、0.1956～0.3016、0.1547～0.2217之間,各群體所有遺傳多樣性指標(biāo)綜合顯示,中華鳑鮍3個(gè)群體的遺傳多樣性保持在一定水平,各居群間的遺傳多樣性水平依次為:安陽(yáng)＞河北＞信陽(yáng)。
　　 (3)利用POPGENE基于Nei's基因多樣性計(jì)算中華鳑鮍各居群間遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.4051,說(shuō)明中華鯖皴各居群間存在強(qiáng)烈的遺傳分化。由Gst計(jì)算的種群間基因流(Nm)

5、為0.7344,基因流水平低。
　　 (4)根據(jù)Nei的公式計(jì)算群體間的無(wú)偏遺傳距離(D)和遺傳相似系數(shù)(S),結(jié)果顯示,河北群體與安陽(yáng)群體遺傳距離最小為0.2033,河北群體與信陽(yáng)群體遺傳距離最大為0.2995;信陽(yáng)群體與河北群體遺傳相似系數(shù)最小為0.7412,安陽(yáng)群體與河北群體遺傳相似系數(shù)最大為0.8160,表明河北群體與安陽(yáng)群體親緣關(guān)系較近,河北群體與信陽(yáng)群體親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。UPGMA聚類顯示,河北群體和安陽(yáng)群體間的親緣關(guān)系