1、刺五加(Eleutherococcus senticosus Maxim)是珍貴的藥用植物,由于不合理采摘,野生刺五加數(shù)量急劇減少,已被列入保護(hù)植物。對(duì)刺五加進(jìn)行人工培育、擴(kuò)繁,是滿足人們需求的主要途徑,而建立高效的刺五加體細(xì)胞發(fā)生體系則是實(shí)現(xiàn)這一目的最為有效的方法。體細(xì)胞胚發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,應(yīng)用分子生物學(xué)手段對(duì)這一發(fā)生機(jī)制進(jìn)行研究是十分有必要的,這對(duì)更好地保護(hù)這一珍貴物種具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　 本文以刺五加的胚性細(xì)胞團(tuán)

2、和非胚性細(xì)胞團(tuán)為材料,對(duì)以胚性細(xì)胞團(tuán)方式產(chǎn)生的體細(xì)胞胚相關(guān)基因進(jìn)行了研究。對(duì)前期做過(guò)的基因芯片結(jié)果進(jìn)行歸類分析,從中挑選差異倍數(shù)較顯著且與體胚發(fā)生相關(guān)的基因進(jìn)行定量PCR差異表達(dá)分析,結(jié)果表明,在選擇的上調(diào)基因中,有一個(gè)基因在定量結(jié)果中表現(xiàn)為下調(diào),其余的所有基因的表達(dá)差異結(jié)果均與芯片結(jié)果相同。通過(guò)同源性分析發(fā)現(xiàn)其余上調(diào)基因均與體細(xì)胞胚發(fā)生有直接或間接的相關(guān)性,由于工作量過(guò)大,所以首先選擇了其中三個(gè)基因進(jìn)行RACE克隆分析,并將它們分別命

3、名為EsAP21,、EsXET1、EsPT1。EsAP21基因全長(zhǎng)為2033bp,編碼549個(gè)氨基酸,同源性分析結(jié)果顯示,該基因與擬南芥等物種PLT基因具有高度同源性,具有AP2/EREBP家族保守序列；EsXET1基因全長(zhǎng)1102bp,編碼290個(gè)氨基酸,多序列比對(duì)顯示該基因編碼的蛋白質(zhì)與多物種的木葡聚糖內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶具有高度同源性,屬于糖基水解酶16家族；EsPT1基因全長(zhǎng)1965bp,編碼528個(gè)氨基酸,同源性比對(duì)結(jié)果顯示該基因編碼

4、的蛋白與磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有很高的同源性,屬于MFS超家族。結(jié)果表明,這三個(gè)基因分別在體細(xì)胞胚發(fā)生的不同時(shí)期上調(diào)表達(dá),對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育以及胚胎發(fā)生、細(xì)胞壁重建和磷酸鹽的運(yùn)輸起重要的作用,推測(cè)在刺五加胚性細(xì)胞的發(fā)生及發(fā)育過(guò)程中這些基因協(xié)調(diào)表達(dá),其中EsAP21基因起決定性作用。同時(shí)應(yīng)用透射電子顯微鏡對(duì)1/3MS固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的刺五加胚性細(xì)胞團(tuán)和非胚性體細(xì)胞胚進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察,對(duì)比結(jié)果表明胚性細(xì)胞具有豐富的細(xì)胞內(nèi)含物,淀粉粒多,細(xì)胞壁厚,核質(zhì)比大