1、目的: 本實(shí)驗(yàn)計(jì)劃嘗試應(yīng)用超順磁氧化鐵(SPIO)標(biāo)記技術(shù)，探討超順磁氧化鐵標(biāo)記鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)的方法以及對(duì)骨髓干細(xì)胞生物活性能力的影響，探討標(biāo)記超順磁氧化鐵的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外磁共振(MR)成的情況，并通過(guò)注射鏈脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型，探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病的治療作用以及標(biāo)記超順磁氧化鐵的骨髓問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞的體內(nèi)成像的情況。 1、獲取Sprague dawley(SD)大鼠骨髓間充質(zhì)

2、干細(xì)胞。 2、建立SD大鼠糖尿病模型。 3、將超順磁氧化鐵標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，檢測(cè)標(biāo)記后的SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物活性情況。 4、將超順磁氧化鐵標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行磁共振掃描，獲取磁共振掃描數(shù)據(jù)。 5、將標(biāo)記超順磁氧化鐵的SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植入SD大鼠糖尿病模型中，進(jìn)行磁共振掃描獲取磁共振掃描數(shù)據(jù)，并觀測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)糖尿病的治療作用。 方法: 1、

3、通過(guò)貼壁法分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并檢測(cè)其生物學(xué)活性。 2、通過(guò)注射鏈脲佐菌素建立SD大鼠糖尿病模型。 3、通過(guò)多聚賴氨酸和干細(xì)胞本來(lái)的吞噬能力將超順磁氧化鐵標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。 4、通過(guò)磁共振掃描儀掃描標(biāo)記超順磁氧化鐵的SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，獲取其磁共振掃描的的數(shù)據(jù)和圖像。 5、通過(guò)測(cè)量SD大鼠的血糖和體重等情況，觀測(cè)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的治療作用。 結(jié)果: 1、

4、SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種后24-36小時(shí)開(kāi)始貼壁。3天后可見(jiàn)細(xì)胞分裂增殖。1周左右見(jiàn)細(xì)胞增殖成集落，部分融合成單層。形態(tài)由原來(lái)的圈形轉(zhuǎn)變?yōu)槌衫w維細(xì)胞樣梭形。堿性磷酸酶(AKP)染色見(jiàn)細(xì)胞呈陽(yáng)性。 2、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外標(biāo)記觀察：超順磁氧化鐵和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞堿性磷酸酶共育24小時(shí)后，顯微鏡下見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)有鐵顆粒，普魯士蘭染色后見(jiàn)標(biāo)記率達(dá)80％以上。通過(guò)四甲基偶氮唑鹽比色(MTT法)實(shí)驗(yàn)和臺(tái)盼藍(lán)負(fù)染

5、實(shí)驗(yàn)，得出標(biāo)記后的BMCS和未標(biāo)記的細(xì)胞的生物活性無(wú)異。 3、磁共振掃描標(biāo)記后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞：T1加權(quán)像(T1W)，T2加權(quán)像(T2W)均見(jiàn)信號(hào)改變，其中T2w的改變更為明顯。 4、鏈脲佐菌素構(gòu)建糖尿病鼠模型：腹腔注射鏈脲佐菌素，1周后出現(xiàn)模型鼠的血糖升高，4周后基本穩(wěn)定，并出現(xiàn)典型的糖尿病臨床表現(xiàn)。 5、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞注入糖尿病鼠模型并磁共振掃描標(biāo)記后BMSC:模型鼠的血糖在注射后有所降低，磁共振掃描下，未

6、見(jiàn)明確的信號(hào)改變。 結(jié)論: 1、貼壁法可以分離SD大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，獲得的細(xì)胞存活和增殖力能力較好。以1×106/ml的細(xì)胞濃度就是可以獲得較好的傳代。 2、超順磁氧化鐵可于體外標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。22.4mmol/L的超順磁氧化鐵已經(jīng)可以在體外標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，標(biāo)記率大于80％。標(biāo)記后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，其內(nèi)的超順磁氧化鐵可以停留在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞長(zhǎng)達(dá)8周，可以滿長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)觀察的需要。標(biāo)記后的骨髓間充

7、質(zhì)干細(xì)胞，體外磁共振掃描中，對(duì)比度可以滿足觀察需要。 3、鏈脲佐菌素可以構(gòu)建的大鼠糖尿病模型。50 mg/kg STZ腹腔注射可以建立類(lèi)似Ⅰ型糖尿病的糖尿病模型。空腹血糖和最高血糖達(dá)16.7 mmol/L以上，并持續(xù)8周以上，而且可見(jiàn)相關(guān)并發(fā)癥出現(xiàn)。 4、超順磁氧化鐵未能在體內(nèi)示綜骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。體內(nèi)超順磁氧化鐵未能示綜骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)的遷移情況，其原因可能和超順磁氧化鐵在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中，隨受體體內(nèi)鐵代謝和標(biāo)