1、五沒食子?；咸烟牵╬entagalloylglucose，PGG）是一種天然多酚化合物，自然界中分布及其廣泛。之前的研究表明PGG 具有多種生物活性，具有治療和預防一些重要疾病如炎癥、腫瘤以及糖尿病的潛能，對宿主沒有毒副作用。卵巢癌是主要的婦科腫瘤之一，目前沒有有效的治療藥物。本課題選取不同的卵巢癌細胞株作為實驗對象，研究五沒食子?；咸烟菍β殉舶┘毎鲋车挠绊?，并初步探討可能的分子機制。
　　 實驗方法：
　　 1.

2、使用MTT 實驗研究PGG在體外對卵巢癌HO-8910、HO-8910PM與SKOV-3細胞增殖的影響，使用普通光學倒置顯微鏡觀察PGG 處理后細胞形態(tài)改變。
　　 2.使用PI 單染流式細胞檢測分析PGG對卵巢癌細胞細胞周期分布影響；使用Hoechst 染色PGG 處理之后的細胞，在熒光顯微鏡下觀察細胞核形態(tài)的變化，看是否出現(xiàn)凋亡特征，然后使用AnnexinV-FITC/PI 雙染流式細胞分析檢測PGG對卵巢癌細胞凋亡率的影響

3、。
　　 3.Western blot 用于檢測細胞內Caspase家族成員的剪切情況，出現(xiàn)Caspase 相應的剪切小片段證明PGG 激活了細胞內Caspase 凋亡信號通路；Western blot還用于檢測NF-κB 轉錄因子的P65 亞基與其抑制蛋白IκB在細胞質與細胞核中的分布變化，確定PGG對NF-κB信號通路的影響。
　　 4.RT-PCR 用來研究PGG對NF-κB的靶基因bcl-2、bcl-xl、cia

4、p-1、ciap-2、survivin、niap、xiap、cyclinD1轉錄影響，這些基因是腫瘤細胞中的促存活基因。
　　 實驗結果
　　 1.PGG能以時間與濃度依賴的方式抑制卵巢癌細胞HO-8910、HO-8910PM與SKOV-3 體外增殖，當PGG 劑量大于20μM，或作用時間達到48 h時，PGG對卵巢癌細胞的抑制呈現(xiàn)出明顯的時間與劑量依賴關系（P<0.05）。
　　 2.PGG 改變三株卵巢癌細胞

5、的細胞周期分布，誘導卵巢癌HO-8910與HO-8910PM細胞凋亡。隨著PGG 處理劑量增加與作用時間延長，細胞周期向S-期富集。Hoechst 染色顯示，PGG 誘導了HO-8910細胞的核發(fā)生凋亡樣形態(tài)改變，對SKOV-3細胞膜與細胞核形態(tài)沒有影響；AnnexinV-FITC 染色結合流式細胞分析顯示PGG 誘導HO-8910與HO-8910PM細胞凋亡出現(xiàn)早期凋亡，但是對SKOV-3細胞凋亡影響較小。
　　 3.PGG

6、處理之后卵巢癌細胞內出現(xiàn)了幾個Caspases家族成員的活性形式，出現(xiàn)相應的c-Caspase-9、3、7；PGG 雖然上調了外源性凋亡途徑中上游的腫瘤壞死因子受體表達，但是抑制了Caspase-8的剪切。
　　 4.PGG 處理卵巢癌細胞抑制轉錄因子NF-?B的P65 亞基核轉位，伴隨著其抑制性蛋白I?B在細胞質中積累；相應地，PGG下調了NF-?B的幾個靶基因bcl-2、bcl-xl、surviving、niap、xiap、