1、本研究根據(jù)GenBank上登錄編號為J X317649.1豬繁殖與呼吸綜合征病毒毒株的基因序列設(shè)計(jì)相應(yīng)引物，經(jīng)過 PCR擴(kuò)增獲得豬繁殖與呼吸綜合征病毒編碼N蛋白（30KD）的基因片段ORF7（367bp）。連接于表達(dá)載體pET-32a，測序驗(yàn)證后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌Rosetta，加入終濃度為0.7 mmol/L IPTG在37℃的搖床振蕩培養(yǎng)5h后，經(jīng)過SDS-PAGE檢測顯示表達(dá)菌能夠高效表達(dá)可溶性重組N蛋白。將所獲重組N蛋白進(jìn)

2、行親和層析純化，SDS-PAGE檢測結(jié)果顯示經(jīng)過純化獲得單一的重組N蛋白；Westen-blot檢測結(jié)果顯示純化所得的重組N蛋白能夠特異性的與豬繁殖與呼吸綜合征病毒陽性血清反應(yīng)。
　　使用純化的可溶性重組 N蛋白包被酶標(biāo)板，經(jīng)過條件摸索后建立了可用于檢測抗體的間接ELISA方法。本研究建立的間接ELIS A方法在檢測其他病毒陽性血清時(shí)不出現(xiàn)交叉反應(yīng)，具有良好的特異性；而且該方法的板內(nèi)變異系數(shù)在1.04％-5.62%，板間變異系數(shù)在

3、1.12%-4.25%，具有良好的重復(fù)性；其與IDEXX公司的PRRS V檢測試劑盒同時(shí)檢測30份臨床樣品，二者的符合率在93%，顯示了二者具有較高的符合率。
　　利用純化的重組 N蛋白免疫 BALB/c小鼠，免疫后獲得脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合，經(jīng)過亞克隆以及篩選獲得兩株能夠穩(wěn)定分泌針對PRRSV的N蛋白單克隆抗體的兩株雜交瘤細(xì)胞株2G4及1B8。本研究制備的針對PRRSV的N蛋白的特異性單抗可以為下一步建立特異性更強(qiáng)