1、老年人細菌性肺炎是嚴重危害老年人健康的常見病、多發(fā)病，具有發(fā)病率高、死亡率高的特點。近年來，隨著對Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)的逐漸研究，發(fā)現(xiàn)TLR4在介導(dǎo)革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素，即脂多糖(lipopolyaccharide，LPS)所引起的免疫反應(yīng)中起到了極其重要的作用。因此，本課題以老齡大鼠為實驗對象，研究肺炎克雷伯桿菌肺炎模型大鼠肺組織炎癥介質(zhì)的變化及TLR4信號通路的異常，以揭示毒素清顆粒治療

2、肺臟損傷的作用機制，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 目的：觀察肺組織細胞因子及TLR4、NF-κB表達在老齡大鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎時的變化，揭示肺炎克雷伯桿菌肺炎老齡大鼠肺臟損傷的特點及分子生物學機制，評價中藥復(fù)方毒素清顆粒的保護作用及作用機制，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 方法：SD青年大鼠(5～6月齡)25只，老齡大鼠(20～22月齡)50只，均為清潔級，雄性。按體重隨機分組，青年大鼠分為對照組和模型組，青年對照組10只，青年模型組

3、15只，于造模前3天及取材前一天灌胃生理鹽水，每日1次，造模48h后取材。老齡大鼠分為對照組、模型組、洛美沙星組、毒素清組，其中老齡模型組20只，其余每組各10只。對照組和模型組處理同青年大鼠；洛美沙星組、毒素清組，造模前3天及取材前一天灌胃，給藥劑量按動物體型系數(shù)比率換算劑量(洛美沙星：40mg·kg-1·d-1，毒素清：5.7g·kg-1·d-1)。肺炎模型采用氣管捅管法復(fù)制，造模后48h取材。測定造模后24h、48h外周血白細胞數(shù)

4、和中性粒細胞比率；測定腹主動脈血血氣分析PaO2、PaCO2；光鏡、電鏡下觀察肺組織病理形態(tài)學改變；采用免疫組織化學技術(shù)檢測肺臟中IL-1、IL-6、TNF-α、NF-κB和TLR4的表達水平；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測肺臟TLR4mRNA的表達。 結(jié)果： 1.支氣管肺泡灌洗液(BALF)菌屬鑒定結(jié)果示：均檢出肺炎克雷伯桿菌，確定為肺炎克雷伯桿菌肺炎。 2.外周血白細胞計數(shù)和中性粒細胞比率變

5、化：青年模型組、老齡模型組24h、48h白細胞數(shù)和中性粒細胞比率均分別較青年對照組、老齡對照組升高顯著(P<0.01)；與老齡模型組比較，毒素清組和洛美沙星組24h、48h白細胞數(shù)、中性粒細胞比率降低顯著(P<0.01)；兩藥物組之間無顯著差異(P>0.05)。 3.動脈血氧分壓和二氧化碳分壓變化：青年模型組和老齡模型組大鼠動脈血PaO2降低和PaCO2升高分別較青年對照組和老齡對照組顯著(P<0.01，P<0.05)；且老齡模

6、型組較青年模型組PaO2降低和PaCO2升高顯著(P<0.05)；與老齡模型組比較，洛美沙星組PaO2升高和毒素清組PaCO2降低、PaO2升高均顯著(P<0.01)；毒素清組PaCO2降低較洛美沙星組顯著(P<0.05)。 4.肺組織含水量：青年模型組、老齡模型組肺組織含水量分別較青年對照組、老齡對照組增高顯著(P<0.05，P<0.01)，其中老齡模型較青年模型升高顯著(P<0.05)；與老齡模型組比較，毒素清組和洛美沙星組

7、肺組織含水量降低顯著(P<0.05)。 5.肺組織病理改變及損傷分級比較5.1普通病理形態(tài)學觀察：青年對照組為正常肺組織，老齡對照組肺組織可見肺泡上皮有退行性改變；青年模型組肺組織可見充血、水腫；老齡模型組肺泡上皮有退行性改變，見有纖維增生，有少部分被破壞，各級支氣管慢性炎癥明顯，其充血、水腫較青年模型組嚴重。與老齡模型組比較，毒素清和洛美沙星組病理損傷改善明顯。 5.2電鏡觀察：青年對照組肺泡Ⅱ型細胞游離面有短小的微絨

8、毛，胞質(zhì)富含線粒體和溶酶體，有較發(fā)達的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體，板層小體豐富。肺泡隔毛細血管密集而連續(xù)。老齡對照組肺泡Ⅱ型上皮細胞微絨毛呈細長的指狀突起，微絨毛間和表面覆蓋有肺表面活性物質(zhì)。Ⅱ型上皮細胞胞漿內(nèi)有大量的板層小體和線粒體，板層小體胞核結(jié)構(gòu)清晰，肺泡隔毛細血管輕度水腫，肺泡擴大。青年模型組和老齡模型組肺泡Ⅱ型細胞質(zhì)板層小體明顯減少，細胞表面微絨毛顯著減少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆?，F(xiàn)象嚴重，細胞和周圍有炎性壞死組織，成纖維細胞及其周邊合

9、成的膠原纖維增多，嗜中性粒細胞核碲裂。線粒體的嵴和膜大部分消失，可見到不完整的高爾基復(fù)合體，而以老齡模型組微絨毛脫落、上皮細胞變性更為明顯。毒素清組和洛美沙星組微絨毛、板層小體數(shù)量輕度減少，線粒體的嵴和膜部分消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度脫顆粒。 5.3肺臟損傷病理分級比較：青年模型組、老齡模型組肺臟病理損傷分別較青年對照組、老齡對照組嚴重(P<0.01)；老齡對照組較青年對照組病理損傷嚴重；與老齡模型組比較，洛美沙星組和毒素清組病理損傷

10、明顯減輕(P<0.01)。 6.各組大鼠肺臟細胞因子的改變6.1肺組織IL-1、IL-6、TNF-α表達的變化：青年模型組、老齡模型組大鼠肺組織IL-1、IL-6、TNF-α的陽性細胞數(shù)及平均光密度分別較青年對照組、老齡對照組增高顯著(P<0.01)；老齡模型組IL-1的陽性細胞數(shù)較青年模型組增高顯著(P<0.01)；與老齡模型組比較，毒素清組和洛美沙星組IL-1、TNF-α的陽性細胞數(shù)及平均光密度降低顯著(P<0.05或P<0

11、.01)；洛美沙星組IL-6的陽性細胞數(shù)降低顯著(P<0.01)；毒素清組IL-1的陽性細胞數(shù)較洛美沙星組降低顯著(P<0.01)。 6.2肺組織NF-κB和TLR4表達的變化：青年模型組和老齡模型組大鼠肺組織NF-κB、TLR4的陽性細胞數(shù)及平均光密度分別較青年對照組和老齡對照組升高顯著(P<0.01)；老齡對照組、老齡模型組NF-κB的陽性細胞數(shù)、TLR4的平均光密度分別較青年對照組、青年模型組增高顯著(P<0.01，P<0

12、.05)；與老齡模型組比較，毒素清組和洛美沙星組NF-κB、TLR4的平均光密度均降低顯著(P<0.01)；毒素清組較洛美沙星組NF-κB的陽性細胞數(shù)降低顯著(P<0.01)。 7.肺組織TLR4mRNA的表達：青年模型組、老齡模型組TLR4mRNA的表達分別較青年對照組、老齡對照組顯著增強(P<0.05、P<0.01)；與老齡模型組比較，毒素清組和洛美沙星組TLR4的表達降低顯著(P<0.01、P<0.05)；毒素清組較洛美沙

13、星組大鼠肺組織TLR4的表達有降低趨勢(P>0.05)。 結(jié)論： 1.老年肺炎的肺臟損傷較青年嚴重，其病理變化可能與增齡因素有關(guān)。 2.肺炎的發(fā)生機制涉及IL-1、IL-6、TNF-α、TLR4和NF-κB的共同參與，老年肺炎肺臟損傷嚴重的機制可能與TLR4、NF-κB的表達增強和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活，從而使炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α在肺臟的水平增強有關(guān)。 3.毒素清顆粒對老年克雷伯桿菌肺炎肺臟