1、目的:
　　本研究中檢測了不同結(jié)腸癌細(xì)胞系中CD133和CD44兩種標(biāo)志物的表達(dá)情況；在體外研究中分析，不同細(xì)胞對131I標(biāo)記的CD133特異性抗體--AC133.1mAb的攝取差異；并在荷瘤裸鼠體內(nèi)研究標(biāo)記抗體靶向性識別CD133陽性腫瘤細(xì)胞的能力，探索放射免疫顯像在體示蹤腫瘤干細(xì)胞的可行性，并為結(jié)直腸癌的放射免疫治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.選用三種結(jié)直腸癌細(xì)胞系HT29、HCT116和DLD-1，采用流

2、式細(xì)胞術(shù)和Western-blot分析檢測其中CD133和CD44分子的表達(dá)情況。
　　2.將三種細(xì)胞進(jìn)行Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)研究，分析細(xì)胞侵襲性與CD133和CD44分子的表達(dá)情況之間的相關(guān)性。
　　3.用131I標(biāo)記CD133分子的特異性單克隆抗體—AC133.1mAb，將標(biāo)記物使用PD-10脫鹽柱進(jìn)行純化，并檢測標(biāo)記抗體的標(biāo)記率、放化純及穩(wěn)定性。
　　4.對上述三種細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記抗體131I-AC133mAb

3、體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)，分析細(xì)胞攝取水平與CD133分子的表達(dá)情況間的關(guān)系。
　　5.建立三種細(xì)胞的荷瘤裸鼠模型，同時分別設(shè)立實(shí)驗(yàn)組和阻斷組，分別于尾靜脈注射標(biāo)記抗體，在不同時間點(diǎn)對其進(jìn)行SPECT/CT斷層顯像及生物學(xué)分布實(shí)驗(yàn)，分析標(biāo)記抗體在體內(nèi)的代謝特點(diǎn)。
　　6.對組織/器官的冰凍切片進(jìn)行免疫熒光檢測分析和放射自顯影研究，分析體內(nèi)標(biāo)記抗體的分布與抗原CD133表達(dá)情況間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.結(jié)腸癌細(xì)胞系H

4、T29、HCT116細(xì)胞中CD133分子的表達(dá)水平分別為91.33±1.66％、90.83±2.47%，明顯高于DLD-1細(xì)胞中CD133分子的表達(dá)水平3.87±0.57%（P＜0.01）；而HT29、HCT116和DLD-1細(xì)胞中CD44表達(dá)水平分別為24.53±8.35%、6.0±0.82%和8.87±3.9%。細(xì)胞Western-blot分析結(jié)果顯示：HT29、HCT116細(xì)胞高表達(dá)CD133，而DLD-1細(xì)胞表達(dá)量較低；而HT2

5、9細(xì)胞中CD44表達(dá)較HCT116和DLD-1細(xì)胞中CD44表達(dá)高。
　　2.三種細(xì)胞Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HT29細(xì)胞和HCT116細(xì)胞穿過的細(xì)胞量較多，DLD-1細(xì)胞僅有少量明顯細(xì)胞穿過。
　　3.標(biāo)記后的131I-AC133mAb的標(biāo)記率為68.37±2.45%，純化后，標(biāo)記抗體的放射性化學(xué)純度為91.18±3.41%，且在體外具有較好的穩(wěn)定性。標(biāo)記抗體的體外細(xì)胞攝取研究結(jié)果顯示：HT29和HCT116細(xì)胞對

6、131I-AC133mAb的攝取在4h達(dá)高峰，分別為29.63±3.92%和33.99±6.65%，其未標(biāo)記抗體阻斷組的攝取率分別為3.22±0.18%和3.67±0.56%；實(shí)驗(yàn)組與阻斷組間存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)；而DLD-1細(xì)胞對131I-AC133mAb的攝取始終較緩慢，在4h時攝取率僅為2.89±0.90%，顯著低于HT29和HCT116細(xì)胞4h的攝取率（P＜0.01）。
　　4.從SPECT/CT顯像結(jié)果和生

7、物分布研究結(jié)果來看，荷HT29和HCT116腫瘤鼠在注射131I-AC133mAb后7天的放射性攝取最高，腫瘤組織的克組織百分?jǐn)z取率分別為5.49±0.42%ID/g和5.04±0.05%ID/g，明顯高于荷DLD-1腫瘤鼠1.20±0.11%ID/g（P＜0.05）；相應(yīng)的腫瘤與肌肉比值（T/M）分別為11.34±0.09，11.31±1.05和3.43±0.53。不同腫瘤組織中標(biāo)記抗體的放射性分布與免疫熒光分析間保持了較好的一致性。

8、
　　5.在阻斷組實(shí)驗(yàn)中，各時間點(diǎn)腫瘤組織均未見明顯的放射性濃聚，且腫瘤組織的放射性生物分布明顯低于實(shí)驗(yàn)組，注射標(biāo)記抗體第7天時，荷HT29和HCT116腫瘤鼠的移植瘤阻斷組的生物分布分別為2.18±0.38%ID/g（n=4），2.06±0.35%ID/g（n=4）。
　　6.組織/器官的冰凍切片進(jìn)行免疫熒光檢測分析和放射自顯影研究顯示：體內(nèi)標(biāo)記抗體的放射性分布與抗原CD133表達(dá)情況相一致。
　　結(jié)論:
　　

9、結(jié)腸癌細(xì)胞系HT29和HCT116細(xì)胞中CD133表達(dá)較DLD-1細(xì)胞高，HT29細(xì)胞中CD44分子表達(dá)水平較HCT116和DLD-1細(xì)胞高；體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)、SPECT/CT斷層顯像、生物分布和放射自顯影研究都體現(xiàn)了這一差異性，且其中CD133的靶向抗體131I-AC133mAb對該抗原有較好的特異性，顯示出以131I-AC133mAb為分子探針的放射免疫顯像在評價CD133陽性腫瘤細(xì)胞的表達(dá)水平及分布情況的可行性，為腫瘤干細(xì)胞的放射