1、目前全世界每年約有二十萬以上的女性患有卵巢癌疾病。與其他身體器官相比較，卵巢的癌癥發(fā)病率盡管比較低，但是其病死率卻很高。據(jù)英國的疾病統(tǒng)計分析獲悉，卵巢癌病死率已經(jīng)位列第五位。上皮性卵巢癌(epithelial ovariancancer, EOC)是最常見的卵巢部位發(fā)生的腫瘤，占所有卵巢部位惡性腫瘤大約85％～90％。
　　上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的異常激活是腫瘤發(fā)

2、生發(fā)展的非常重要因素之一，其與動物胚胎發(fā)育和腫瘤細胞生物學(xué)特性密切相關(guān)，特征是上皮細胞失去極性和接觸抑制而獲得間質(zhì)表型，進而參與調(diào)控EOC的增殖、逃逸、轉(zhuǎn)移及間質(zhì)血管生成。E盒鋅指結(jié)合蛋白2(zinc finger E-box bindinghomeobox2，ZEB2)作為EMT的核心因子，其與E-cadherin基因啟動子的E盒結(jié)合，抑制E-cadherin的表達，誘導(dǎo)細胞發(fā)生EMT，通過介導(dǎo)腫瘤細胞的黏附性、細胞極性、細胞凋亡，調(diào)

3、控原癌基因和維持微環(huán)境等過程，從而增強腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。ZEB2在許多惡性腫瘤組織中能夠增強腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，如宮頸癌、甲狀腺癌、乳腺癌等，ZEB2的過度表達極有可能增強EOC的侵襲和轉(zhuǎn)移，但是到目前為止ZEB2在EOC組織中的表達情況報道卻較少。原癌基因C-myc(cellular avian myelocytoma virus，C-myc)編碼的蛋白為62KD的磷酸化蛋白，位于細胞核內(nèi)，具有DNA結(jié)合能力，其表達可促進D

4、NA復(fù)制，調(diào)節(jié)細胞周期、細胞增殖及分化等功能，C-myc編碼的蛋白過度表達極有可能促進EOC的惡變、進展等過程。
　　目的:
　　本研究的目的是應(yīng)用免疫組織化學(xué)二步法技術(shù)通過研究正常卵巢組織、上皮性卵巢癌組織中的E盒鋅指結(jié)合蛋白2(ZEB2)及原癌基因C-myc(C-myc)的表達水平，分析ZEB2及C-myc在各組織中的表達及相關(guān)性，分析兩者之間的關(guān)系，并探討它們與EOC侵襲、轉(zhuǎn)移以及臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　方

5、法:
　　1.標(biāo)本的收集
　　選取2008年9月至2015年1月南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院病理科存檔石蠟包埋卵巢組織標(biāo)本及西安愛麗娜生物技術(shù)公司提供卵巢組織標(biāo)本共204例，其中EOC組織191例（粘液性腺癌32例，漿液性腺癌159例），正常卵巢組織13例、均經(jīng)病理學(xué)證實。191例EOC患者根據(jù)國際FIGO臨床分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期137例，Ⅱ期28例，Ⅲ期17例，V期9例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移173例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例;無遠處轉(zhuǎn)移182例，

6、有遠處轉(zhuǎn)移9例;T分期中T1期139例，T2期32例，T3期20例。年齡在22～81歲之間，其中＞47歲182例，＜47歲9例。EOC所有患者術(shù)前均未行放療、化療、生物治療。對照組13例正常卵巢組織為同期因非卵巢疾病接受手術(shù)治療獲得的正常卵巢標(biāo)本。
　　2.免疫組化
　　獲取的正常卵巢組織13例、EOC組織191例組織的石蠟標(biāo)本，連續(xù)切片。石蠟切片二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各脫蠟30分鐘，梯度酒精脫水(100％，90％，80％，70％)

7、，用PH7.4的PBS溶液沖洗后，滴加PH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，將切片完全浸入檸檬酸緩沖液中，加熱沸騰后進行抗原修復(fù)。加入一抗（小鼠抗人ZEB2單克隆抗體和小鼠抗人C-myc單克隆抗體均購自美國Abcam公司）小鼠抗人ZEB2單克隆抗體和小鼠抗人C-myc單克隆抗體，室溫孵育60min; PBS沖洗后加入二抗（上海吉凱基因科技有限公司）室溫孵育60min。PBS沖洗3次×3min，DAB顯色，室溫孵育3～5min，光鏡下控制顯色，顯色

8、30秒后蒸餾水沖洗終止顯色，蘇木精復(fù)染1分鐘，1％酒精分化，蒸餾水沖洗返藍5分鐘，切片浸入梯度酒精(70％、80％、90％、95％、100％)脫水各2分鐘，二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各透明后用中性樹膠封片，顯微鏡下觀察染色效果。
　　3.免疫組化結(jié)果判斷
　　結(jié)果判定采用雙盲法，同時由2位資深病理科醫(yī)師獨立觀察每張切片后進行判定。判定標(biāo)準(zhǔn)采用半定量評分法，在顯微鏡下每張切片隨機選擇5個高倍鏡視野，計算100個細胞/視野，根據(jù)染色強度和陽

9、性細胞百分比進行判定。陽性細胞百分比:無陽性細胞為0分，1％～為1分，10％～為2分，50％～為3分，75％～為4分;染色強度:無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。2項評分乘積＞4分為陽性，≤4為陰性。
　　4.統(tǒng)計分析
　　實驗數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。ZEB2和C-myc在正常卵巢組織及EOC組織的表達、各臨床病理因素之間的相關(guān)性及相關(guān)關(guān)系均采用X2和Spearman等

10、級相關(guān)檢驗，P＜0.05（雙側(cè)檢驗）為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.ZEB2蛋白主要分布于細胞的胞質(zhì)，偶爾也可出現(xiàn)細胞核的表達，呈淡黃色至棕褐色顆粒，正常卵巢組織有較低的表達率。而C-myc蛋白主要定位于細胞核，也可出現(xiàn)細胞質(zhì)的表達，呈棕褐色顆粒，在正常組織的表達率較低。
　　2.ZEB2的表達
　　(1)ZEB2在EOC組織的陽性表達率(49.2％94/191)高于正常卵巢組織(7.7％1/13)，差

11、異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.004)。
　　(2)ZEB2表達與EOC的病理分型相關(guān)，在黏液性腺癌的陽性表達率(70.0％24/32)高于漿液性腺癌(44.0％70/159)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。
　　(3)ZEB2的表達與FIGO分期、T分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)系，在Ⅲ～V期中陽性表達率(69.2％18/26)高于Ⅰ～Ⅱ期(46.1％76/165)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.028);在腫瘤T分期

12、中陽性表達率T3＞T2＞T1(80％16/20 VS62.5％20/32 VS41.7％58/139，P=0.002)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，同時與腫瘤分化程度亦有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.022);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達率(72.2％13/18)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(46.8％81/173)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.04)。
　　(4)ZEB2的表達在EOC組織中，與患者的年齡(P=0.536)及遠處轉(zhuǎn)移(P=0.326)等未見明顯統(tǒng)

13、計學(xué)意義。
　　3.C-myc的表達
　　(1)C-myc在EOC組織的陽性表達率(53.9％103/191)高于正常卵巢組織(15.4％2/13)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.007）。
　　(2)C-myc表達與EOC的分化程度相關(guān)，在低分化組腺癌組織的陽性表達率(59.7％74/124)高于高分化組腺癌組織(43.3％29/67)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.03）。
　　(3)C-myc的表達與FIGO分期

14、、T分期有關(guān)系，在Ⅲ～Ⅳ期中陽性表達率(73.1％19/26)高于Ⅰ～Ⅱ期（51.0％84/165），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.035）;在腫瘤T分期中陽性表達率T3＞T2＞T1(80％16/20 VS62.5％20/32 VS48.2％67/139，P=0.016)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(4)C-myc的表達在EOC組織中，與患者的年齡(P=0.268)、病理分型(P=0.38)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.102)、遠處轉(zhuǎn)移(

15、P=0.182)等未見明顯統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.ZEB2和C-myc的關(guān)系
　　(1)ZEB2和C-myc在EOC組織中的表達經(jīng)過Spearman相關(guān)性分析，兩者具有直線相關(guān)性，且呈正相關(guān)性（相關(guān)系數(shù)R=0.358，P＜0.001）。
　　(2)ZEB2及C-myc的共同表達與T分期和FIGO分期分別具有直線相關(guān)性(P＜0.001:P=0.008)。
　　結(jié)論:
　　1.ZEB2主要分布于腫瘤細胞的胞質(zhì)，呈

16、淡黃色至棕褐色顆粒，在EOC組織中具有較高的表達率，而且隨著腫瘤FIGO分期、腫瘤T分級的升高，ZEB2的陽性表達率也隨之增高;EOC組織中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的ZEB2陽性表達率遠高于無淋巴轉(zhuǎn)移者，提示ZEB2表達對EOC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移起著促進的作用。結(jié)合以上結(jié)果提示，ZEB2作為轉(zhuǎn)錄因子，其較高的表達率與TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移確切有關(guān)，ZEB2的陽性表達率隨著TNM分期而越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性也越高。ZEB2作為促癌基因在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要

17、作用，它可能成為評價EOC發(fā)展、轉(zhuǎn)移的一個有價值的指標(biāo)。
　　2.C-myc蛋白主要定位于細胞核，呈棕褐色顆粒，在EOC組織中具有較高的表達率，而且與腫瘤FIGO分期、腫瘤T分期、腫瘤分化程度有關(guān)。隨著腫瘤FIGO分期升高、T分期越高、腫瘤分化程度越低，C-myc的陽性表達率越高，但與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分型、遠處轉(zhuǎn)移等不相關(guān)。由此可以看出C-myc的高表達與TNM分期、T分期、腫瘤分化程度確切有關(guān)，C-myc表達越高腫瘤分化程