1、目的：探討及推廣熒光定量PCR技術(shù)在脊柱結(jié)核診斷中的應用。
　　方法：選擇結(jié)核分枝桿菌16SrDNA和CFP10兩個基因作為本次實驗的靶基因，分別設計兩對特異性的引物，應用SYBR Green I法（熒光染料法）建立熒光定量PCR反應體系，依據(jù)基因數(shù)據(jù)庫中所提供的兩種基因的保守序列，利用人工化學合成法獲得目的基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒體pGH-16SrDNA和pGH-CFP10，并對重組質(zhì)粒體進行酶切鑒定和序列測定，成功構(gòu)建陽性標準品，并

2、制作出標準曲線及曲線方程，最后用此方法對20例臨床確診為脊柱結(jié)核患者的血漿標本以及20例非脊柱結(jié)核患者的血漿標本進行檢測與定量。
　　結(jié)果：本次實驗中所建立的熒光定量方法線性關系好，均呈線性負相關。兩個基因（16SrDNA和CFP10）的標準曲線的相關系數(shù)分別達到0.999和0.998，實驗中最低檢測下限分別達到1.48×101copies/ul和2.67×101copies/ul，而且特異性好，兩條基因的溶解曲線均呈現(xiàn)單一的峰值