1、目的：利用超聲介導載紫杉醇微泡及載siRNA微泡，進行藥物靶向釋放，用于治療宮頸癌的實驗研究。通過自制高分子材料PLGA為外殼，包裹紫杉醇及針對HPV16E6、E7特異性的siRNA，制備載藥、載siRNA微泡，在體外作用于宮頸癌細胞，初步評價超聲介導載紫杉醇及載 siRNA微泡聯(lián)合應(yīng)用對宮頸癌的協(xié)同抑制效果，為進一步臨床應(yīng)用研究提供實驗依據(jù)。
　　方法：⑴利用改良型雙乳劑揮發(fā)法和低溫真空干燥技術(shù)，自制出載紫杉醇和載siRNA的P

2、LGA超聲微泡。⑵選擇宮頸癌Caski細胞進行培養(yǎng)，使用不同濃度的紫杉醇作用于宮頸癌Caski細胞，探索其對宮頸癌Caski細胞體外抑制的最佳濃度，作為制作超聲微泡時紫杉醇的濃度標準。⑶根據(jù)siRNA的設(shè)計的基本規(guī)則，合成靶向于 HPV-16之E6、E7的 siRNA，進而轉(zhuǎn)染宮頸癌Caski細胞，通過DAPI細胞染色確定相關(guān)siRNA對宮頸癌Caski細胞的抑制作用。⑷通過MTT比色法摸索出超聲輻照擊破本實驗合成的PLGA微泡的時間強

3、度最適宜參數(shù)，作為未來實驗超聲輻照的參數(shù)。⑸實驗將宮頸癌Caski細胞分為四組：空白對照組、載紫杉醇微泡組、載siRNA微泡組、聯(lián)合載紫杉醇及載siRNA微泡組。按照最佳參數(shù)給予相同頻率及時間強度的超聲輻照，48小時后，進行MTT試驗，WB檢測凋亡蛋白、FCM檢測細胞凋亡率及細胞周期的改變，評價超聲介導載紫杉醇微泡聯(lián)合載siRNA微泡對宮頸癌細胞協(xié)同抑制作用的效果。
　　結(jié)果：①通過改良型雙乳劑揮發(fā)法和真空冷凍干燥技術(shù)，制備出載紫

4、杉醇和載siRNA的PLGA超聲微泡，形態(tài)規(guī)則呈球形，粒徑分布均勻，包封率達到89.58％，載藥率達到11.86%，達到進一步實驗的要求。②使用不同濃度的紫杉醇進行抑制宮頸癌Caski細胞增殖的體外實驗，明確了10-6mol/L濃度的紫杉醇對宮頸癌Caski細胞體外抑制的效果最佳。③尋找并合成了靶向于 HPV-16之E6、E7的 siRNA，通過DAPI細胞染色驗證了其對宮頸癌Caski細胞增殖有良好抑制作用。④通過MTT比色法探索超聲

5、輻照擊破本實驗自制PLGA微泡的參數(shù)，采用頻率1.5W/cm2，輻照35s時，其效果最佳。⑤與空白對照組相比，載紫杉醇微泡組宮頸癌Caski細胞增殖受到一定程度抑制，載siRNA微泡組宮頸癌Caski細胞增殖有一定抑制，聯(lián)合載紫杉醇及載siRNA微泡組宮頸癌Caski細胞增殖的抑制作用更加明顯，其Bax、Caspase3促凋亡蛋白的表達上調(diào)明顯，Bcl2抑凋亡蛋白下調(diào)明顯，流式細胞儀檢測其細胞凋亡率更高。
　　結(jié)論：⑴自制PLGA