1、目的:
　　 1.通過建立類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠CIA模型,尋找一種新的可以干擾或作用于RA的蛋白,初步探討此蛋白與RA的相關(guān)性；
　　 2.分析這種蛋白在RA發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法:
　　 1.建立類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物模型(CIA模型):牛Ⅱ型膠原蛋白(BoyineCollagenⅡ)和弗氏不完全佐劑(IFA)充分乳化后作為CIA模誘導(dǎo)劑,對(duì)Wistar大鼠尾根、足底、背部和脊椎兩側(cè)四點(diǎn)注射,一周后

2、加強(qiáng)免疫一次,對(duì)CIA模型進(jìn)行全面評(píng)價(jià),如:關(guān)節(jié)腫脹度、組織病理學(xué)、免疫組化檢測(cè)和細(xì)胞因子檢測(cè)等；
　　 2.食物抗原與CIA的相關(guān)性:通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)和免疫印跡法(Western blot)初步檢測(cè)食物中一些抗原和食物中各種異源型膠原蛋白與CIA的相關(guān)性；
　　 3.蛋白結(jié)構(gòu)分析:通過Protein Explorer2.80蛋白三維重建軟件和Peptool Liter蛋白質(zhì)二維重建軟件對(duì)特異性蛋白結(jié)

3、構(gòu)的初步預(yù)測(cè),分析特異性蛋白的結(jié)構(gòu)相關(guān)性,解釋說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
　　 4.食物抗原干預(yù)CIA模型:為了研究臨床食物抗原對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的影響,本實(shí)驗(yàn)用食物抗原對(duì)CIA模型進(jìn)行干預(yù),即對(duì)CIA模型鼠進(jìn)行食物抗原灌胃實(shí)驗(yàn),檢測(cè)CIA模型大鼠的各方面變化,觀察記錄實(shí)驗(yàn)鼠的活動(dòng)和飲食變化,觀察腸道病理變化和代謝變化,并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié)。
　　 結(jié)果:
　　 1.動(dòng)物模型在首次免疫后,實(shí)驗(yàn)組大鼠食欲開始下降,活動(dòng)頻

4、繁度下降,加強(qiáng)免疫后一周,實(shí)驗(yàn)組大鼠四肢腫脹,佐劑對(duì)照組和空白對(duì)照組的大鼠無明顯變化,實(shí)驗(yàn)組大鼠踝關(guān)節(jié)直徑,血清TNF-α、IL-17、IL-6和IL-1水平明顯高于佐劑對(duì)照組和空白對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)組踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞免疫熒光抗原定位檢測(cè)到很強(qiáng)的熒光,佐劑對(duì)照組和空白對(duì)照組熒光強(qiáng)度很弱；實(shí)驗(yàn)組RA的發(fā)病率為77.8％;
　　 2.血清ELISA檢測(cè)食物中異源性膠原蛋白的免疫原性很高,八大類食物抗原中雞蛋和牛奶與RA存在交叉免疫,并進(jìn)行統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)分析,差距有統(tǒng)一學(xué)意義(P<0.05); Western—blot檢測(cè)到雞蛋和牛奶中存在實(shí)驗(yàn)組有別于佐劑對(duì)照組和空白對(duì)照組有兩條蛋白條帶(分別在45kd～60kd和80kd～90kd之間),初步認(rèn)為雞蛋中的特異性蛋白是卵清蛋白,牛奶中的特異性蛋白為酪蛋白；
　　 3.牛Ⅱ型膠原蛋白、雞蛋中卵清蛋白和牛奶中的酪蛋白的二維和三維結(jié)構(gòu)分析認(rèn)為此三種蛋白在結(jié)構(gòu)上存在相同的抗原位點(diǎn)和結(jié)構(gòu)相似性,即雞蛋中的卵清蛋白和牛奶中的一種蛋白(初

6、步認(rèn)為是酪蛋白)的抗原表位與牛Ⅱ型膠原蛋白存在部分結(jié)構(gòu)相似性；
　　 4.對(duì)CIA模型大鼠灌胃實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),大鼠的炎癥細(xì)胞因子的水平升高,腸道的通透性增大,胃腸道病理發(fā)生改變。
　　 結(jié)論:
　　 1.Ⅱ型膠原蛋白配合弗氏不完全佐劑可以很好的誘導(dǎo)建立CIA模型；
　　 2.初步認(rèn)為食物抗原雞蛋中(初步認(rèn)為是卵清蛋白)和牛奶中的一種蛋白(初步認(rèn)為是酪蛋白)與RA的發(fā)病存在一定的相關(guān)性,可能加重RA的病情,對(duì)于其