1、節(jié)球藻毒素(NOD)是由泡沫節(jié)球藻(Nodularia spumigena)通過(guò)不同分子量的多酶復(fù)合物合成并分泌產(chǎn)生的一種環(huán)狀五肽藍(lán)藻肝毒素，可對(duì)人類、動(dòng)物、植物和真核微生物產(chǎn)生不利影響。
　　采用反相高效液相色譜分離配置紫外檢測(cè)器檢測(cè)，初步建立了一種鯽魚(yú)肌肉、血漿、肝胰臟和腎臟組織中NOD含量的檢測(cè)方法。將勻漿或剪碎后的鯽魚(yú)組織用90％甲醇水溶液超聲提取，離心，離心后取上清液加正己烷去脂，離心后棄上層正己烷相，下清液于40℃下氮

2、吹接近吹干，用純甲醇溶解并稀釋至甲醇含量約10%，CNW Bond C18小柱凈化除雜，洗脫液于40℃下氮吹吹干，純甲醇溶解，溶液利用0.45μm的有機(jī)微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，取濾液20μL，238nm檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行 RP-HPLC檢測(cè)。結(jié)果表明：NOD在肌肉和血漿組織中的檢出限分別為11.30μg/kg和24.00μg/kg。肌肉、肝胰臟及腎臟中NOD為0.05~5.00 mg/kg，血漿中為0.05~5.00mg/L時(shí)，色譜峰峰面積與濃度呈

3、良好的線性相關(guān)(R2>0.99)。各組織中NOD的平均回收率均在(87.93±14.38)%～(98.77±11.56)%，平均批內(nèi)RSD為(1.12±0.99)%～(3.50±1.88)%。該檢驗(yàn)方法可應(yīng)用于鯽魚(yú)體內(nèi)NOD的動(dòng)態(tài)分布以及殘留檢測(cè)，為其他水產(chǎn)品中NOD含量的檢測(cè)以及水產(chǎn)品質(zhì)量的安全控制提供了有效的工具。
　　以0.25mg/kg和0.10mg/kg的給藥劑量進(jìn)行單次腹腔注射給藥，研究了NOD在鯽魚(yú)體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布。研

4、究發(fā)現(xiàn)：兩種給藥劑量下，肝胰臟中NOD的含量變化范圍分別為0.600~4.029mg/kg和0.229~0.753mg/kg；腎臟中NOD的含量變化范圍分別為0.138~1.193mg/kg和0.160~0.725mg/kg；血漿中NOD的含量變化范圍分別為0.118~0.406mg/kg和0.035~0.079mg/kg；肌肉中NOD的含量變化分別為0.035~0.074mg/kg和0.032~0.050mg/kg。NOD在鯽魚(yú)四種組

5、織中均有殘留蓄積，且肝胰臟和腎臟組織中NOD的含量在所取時(shí)間點(diǎn)均高于初始注射劑量，四種組織對(duì) NOD蓄積能力的大小為肝胰臟>腎臟>血漿>肌肉。因此可得，鯽魚(yú)肝胰臟和腎臟為NOD的主要蓄積庫(kù)，這為進(jìn)一步探究NOD在其他淡水雜食性魚(yú)類體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布奠定了基礎(chǔ)。
　　設(shè)計(jì)了A(空白對(duì)照)、B(甲醇對(duì)照)、C(0.05mg/kg)、D(0.10mg/kg)、E(0.25mg/kg)5個(gè)實(shí)驗(yàn)組，研究了NOD對(duì)鯽魚(yú)血細(xì)胞參數(shù)的影響，其中C、D

6、、E三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均采用單次腹腔注射給藥，B組注射純甲醇，A組不作任何處理作為空白對(duì)照，所有注射體積均按照鯽魚(yú)的實(shí)際體重進(jìn)行。研究發(fā)現(xiàn)：NOD對(duì)總白細(xì)胞(WBC)數(shù)目的影響不大，淋巴細(xì)胞(Lymph)數(shù)目以及單核細(xì)胞(Mon)數(shù)目有所增加，中性粒細(xì)胞(Gran)數(shù)目有所降低。淋巴細(xì)胞為魚(yú)類主要的免疫細(xì)胞，單核細(xì)胞在魚(yú)類的免疫功能中起到傳遞抗原的作用，產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因可能是NOD激活了鯽魚(yú)體內(nèi)的特異性免疫系統(tǒng)使得魚(yú)體內(nèi)的免疫細(xì)胞增加。紅細(xì)胞

7、(RBC)數(shù)目、血紅蛋白(HGB)含量以及紅細(xì)胞壓積(HCT)為紅細(xì)胞參數(shù)的3個(gè)重要指標(biāo)，其他指標(biāo)如平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)和紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW)均與其相關(guān)。結(jié)果表明，總紅細(xì)胞數(shù)目、血紅蛋白含量在短時(shí)間內(nèi)有所降低，可能原因是NOD引起魚(yú)類正常出血性貧血或NOD引起魚(yú)體內(nèi)組織器官出血，引發(fā)魚(yú)體內(nèi)的組織器官損傷。
　　以鯽魚(yú)(Carassius aura

8、tus)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究了NOD對(duì)鯽魚(yú)肝胰臟生理生化的影響，設(shè)定實(shí)驗(yàn)組分別為A(空白對(duì)照)、B(甲醇對(duì)照)、C(0.05mg/kg)、D(0.10mg/kg)、E(0.25mg/kg)。其中C、D、E三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均采用單次腹腔注射給藥，B組注射純甲醇，A組不作任何處理作為空白對(duì)照，所有注射體積均按照鯽魚(yú)的實(shí)際體重進(jìn)行。研究發(fā)現(xiàn)，NOD對(duì)鯽魚(yú)肝胰臟CAT活力的影響，C、D、E三個(gè)劑量組中CAT均受到了誘導(dǎo)，其中C組CAT活力在第3h、24h

9、和192h極顯著高于對(duì)照組，第0.5h、12h顯著高于對(duì)照組；D組中CAT活力在第3h、6h和24h極顯著高于對(duì)照組，第0.5h和192h顯著高于對(duì)照組，E組中CAT活力在第24h和48h極顯著高于對(duì)照組，第0.5h和1h顯著高于對(duì)照組。結(jié)果表明，在NOD的脅迫下，鯽魚(yú)機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生了過(guò)量的活性氧自由基。NOD對(duì)鯽魚(yú)肝胰臟總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性無(wú)明顯的影響。鯽魚(yú)肝胰臟GPX在低劑量組和中劑量組中均受到誘導(dǎo)，而在高劑量組中先受到誘

10、導(dǎo)而后受到抑制，且抑制作用較為明顯，產(chǎn)生這一現(xiàn)象的可能原因是高劑量組NOD在一定程度上對(duì)鯽魚(yú)機(jī)體產(chǎn)生了一定的氧化損傷，使得機(jī)體的抗氧化能力降低。還原型谷胱甘肽(GSH)作為GPX的底物，低劑量組和高劑量組中GSH含量均低于對(duì)照組，而中劑量組中呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，可能原因是在NOD注射一定時(shí)間之后，鯽魚(yú)機(jī)體對(duì)NOD有解毒作用，而高劑量組中GSH含量保持在較低水平表明鯽魚(yú)機(jī)體內(nèi)氧化損傷增加，抗氧化能力降低。低、中、高三個(gè)劑量組中丙二醛(