1、目的：①建立天山雪蓮藥材的高效液相指紋圖譜，為該藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。②對(duì)天山雪蓮總黃酮提取物進(jìn)行初步質(zhì)量研究、穩(wěn)定性研究及藥效學(xué)研究，為該提取物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。方法：①收集不同產(chǎn)地的天山雪蓮藥材，采用梯度洗脫法建立HPLC指紋圖譜，應(yīng)用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》(2004版)軟件對(duì)指紋圖譜進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。②采用比色法對(duì)天山雪蓮總黃酮提取物中的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定。③采用高效液相色譜法對(duì)天山雪蓮總黃酮提取物中的蘆丁和紫丁

2、香苷同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。④采用影響因素試驗(yàn)考察溫度、濕度、光線對(duì)天山雪蓮總黃酮提取物的影響。⑤采用二甲苯致小鼠耳腫脹、冰醋酸致小鼠扭體、角叉菜膠致大鼠足跖腫脹、Freund's完全佐劑致大鼠原發(fā)性、繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎損害和棉球肉芽腫等模型對(duì)照觀察天山雪蓮總黃酮提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛等作用，采用MTT法測(cè)定對(duì)小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果：①建立了天山雪蓮藥材的HPLC指紋圖譜，對(duì)圖譜進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)雖產(chǎn)自不同地區(qū)，但圖譜相似度差別不顯著。②用比色法測(cè)定

3、天山雪蓮提取物中總黃酮含量，方法學(xué)考察表明本法符合測(cè)定要求，其中標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.5251x-0.0223(r=0.9996)，蘆丁在0.2-1.2mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；精密度試驗(yàn)RSD為0.46％；穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為1.01％，表明供試品溶液放置5天對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響；重復(fù)性試驗(yàn)RSD為0.70％；加樣回收率試驗(yàn)平均回收率102.32％，RSD為0.96％；3批樣品中總黃酮含量分別為44.39％、42.64％、43.14％。③用

4、高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定天山雪蓮總黃酮提取物中的蘆丁和紫丁香苷，方法學(xué)考察表明本法符合測(cè)定要求，其中紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=25842626.81C-939.15，r=0.9999，表明在0.00276～0.02208mg/ml范圍內(nèi)，紫丁香苷峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=17863886.50C-28941.33，r=0.9996，表明在0.02～0.16mg/ml范圍內(nèi)，蘆丁峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系

5、；精密度試驗(yàn)紫丁香苷和蘆丁的RSD分別為0.97％和0.90％：重復(fù)性試驗(yàn)紫丁香苷和蘆丁的RSD分別為1.16％和1.13％；穩(wěn)定性試驗(yàn)紫丁香苷和蘆丁的RSD分別為1.78％和1.89％；加樣回收率試驗(yàn)紫丁香苷平均回收率為102.56％，RSD為1.40％；蘆丁平均回收率為101.85％，RSD為1.89％；3批樣品中紫丁香苷含量分別為0.88％、0.85％、0.97％；蘆丁含量分別為7.22％、6.34％、6.82％。④影響因素試驗(yàn)結(jié)

6、果表明，溫度(60℃)、光照(45001x)對(duì)天山雪蓮提取物的外觀性狀無(wú)影響，但相對(duì)濕度(RH75％)可引起其吸潮結(jié)塊；溫度(60℃)對(duì)天山雪蓮提取物中總黃酮、紫丁香苷和蘆丁的含量均無(wú)影響；相對(duì)濕度(RH75％)和光照(45001x)對(duì)天山雪蓮提取物中紫丁香苷含量無(wú)影響，但可使其中總黃酮和蘆丁的含量略有降低；提示該提取物應(yīng)儲(chǔ)存于干燥避光環(huán)境。⑤藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，天山雪蓮總黃酮提取物對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎原發(fā)性和繼發(fā)性損害均有保護(hù)作用，并能抑制二

7、甲苯致小鼠耳腫脹，明顯減少冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，能減輕角叉菜膠致大鼠足腫脹度，明顯抑制大鼠棉球肉芽腫，從抑制率來(lái)看，天山雪蓮總黃酮提取物大劑量作用均優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥野木瓜片；天山雪蓮總黃酮提取物在濃度0.13-4mg/ml范圍內(nèi)對(duì)T、B淋巴細(xì)胞的增殖均有明顯抑制作用，在濃度<0.06mg/ml時(shí)抑制作用均明顯減弱；說(shuō)明天山雪蓮總黃酮提取物有良好的抗炎鎮(zhèn)痛和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用。結(jié)論：①建立天山雪蓮藥材的指紋圖譜，為綜合評(píng)價(jià)天山雪蓮藥