1、第一部分
　　 Ghrelin通過PI3K/Akt通路抑制氧化應激誘導的成年大鼠心肌細胞凋亡
　　 目的：觀察ghrelin對高濃度葡萄糖和棕櫚酸鈉誘導的成年大鼠心肌細胞凋亡的影響,并探討ghrelin抗凋亡的細胞分子機制。
　　 方法：分離培養(yǎng)原代成年大鼠心肌細胞,用高葡萄糖和游離脂肪酸誘導心肌細胞產生氧化應激。采用annexin-v-FITC/PI染色和caspase-3底物發(fā)光法檢測心肌細胞凋亡,DCFH-

2、DA熒光探針檢測心肌細胞氧化應激,ELISA檢測Akt和Erk磷酸化蛋白以及細胞核內NFκB含量,realtimePCR和western blot檢測抗凋亡基因的表達。
　　 結果：①ghrelin能夠抑制高糖和棕櫚酸鈉誘導的心肌細胞凋亡(P＜0.05),但不能抑制氧化應激的產生。②ghrelin的抗凋亡作用能夠被wortmannin阻斷(P＜0.05),但不能被PD98059阻斷。③ghrelin能夠刺激Akt和Erk1/2磷

3、酸化,并且促使NFκB向細胞核移位。④wortmannin能夠抑制NFκB向細胞核移位。⑤realtimePCR檢測發(fā)現c-iap基因的表達在ghrelin刺激8h后達到高峰,是對照組的17.9倍。Bcl-2、bcl-xl和c-fos基因表達20h后達到高峰,分別是對照組的12.2、4.4和4.3倍。⑥1μ Mghrelin刺激24h后,IAP-1和Bcl-2蛋白在心肌表達較對照組分別上升3.67倍和2.59倍。
　　 結論：g

4、hrelin有抑制氧化應激誘導的心肌細胞凋亡的作用,但ghrelin不具有抗氧化作用。Ghrelin通過激活PI3K/Akt通路,導致BAD磷酸化,以及NFκB向細胞核轉位增加抗凋亡基因表達實現抗凋亡作用。
　　 第二部分
　　 PI3K調節(jié)亞基P85α在自發(fā)性糖尿病大鼠心肌中表達下降
　　 目的：研究糖尿病晚期病變心肌的胰島素信號通路的改變。
　　 方法：選用Otsuka Long-Evans Toku

5、shima Fatty(OLETF)和Long EvansTokushima Otsuka(LETO)分別作為實驗組和對照組。采用基因芯片、相對定量Realtime PCR、Western blotting方法比較OLETF和LETO大鼠心肌p85α表達差異。
　　 結果：與LETO組大鼠相比,OLETF大鼠血漿胰島素水平下降(0.27±0.13 vs.2.39±0.34 ng/ml,p＜0.000),甘油三脂和膽固醇增加(1.

6、73±0.34 vs.0.48±0.08 mmol/L,p＜0.000;4.41±0.21 vs.2.25±0.75 mmol/L,p＜0.001),左心室內壓舒張期下降速率(-dp/dt)降低30％(p＜0.05)?；蛐酒瑱z測顯示OLETF心肌組織中P85α基因表達量減少達8倍之多。Realtime-PCR和免疫印跡實驗證實OLETF大鼠的P85α基因在轉錄和翻譯水平較對照組大鼠分別下降了81.5％和43.2％(P＜0.05、P＜0