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文檔簡介
1、目的:利用大鼠血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)培養(yǎng),研究血管緊張素Ⅳ(angiotensinⅣ,AngⅣ)在VSMCs增殖中的作用,以及過氧化物酶體增殖物激活受體-α(peroxisomeproliferator-activated receptor-α,PPARα)/一氧化氮(nitric oxide,NO)信號通路的變化;并采用中藥黃連主要活性成分小檗堿(berberine,BB
2、R)進(jìn)行干預(yù),探討B(tài)BR的作用及該作用與PPARa/NO信號通路的關(guān)系。
方法:體外培養(yǎng)大鼠VSMCs,以吸光度值(A490)和總蛋白含量為VSMCs增殖指標(biāo)。Real time RT-PCR和Western blot方法分別檢測mRNA和蛋白水平的表達(dá),比色法和硝酸還原法分別檢測一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)活性和NO濃度。
結(jié)果:AngⅣ(0.01、0.1、1 nmol·
3、L-1)使A490與總蛋白含量表達(dá)均明顯增加(P＜0.01),促進(jìn)VSMCs增殖,其中以AngⅣ0.1 nmol·L-1作用最為明顯。而PPARαmRNA和蛋白的表達(dá)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)mRNA的表達(dá)均降低(P＜0.05),同時使Nos活性和NO濃度下降(P＜0.01)。PPARa激動劑非諾貝特(fenofibrate,FF)與No前體L-精氨酸(L-arg
4、inine,L-arg)均可明顯抑制AngⅣ誘導(dǎo)的VSMcs增殖,提高PPAR僅和eNOS的表達(dá),使NOS活性和NO濃度增加(P＜0.05)。而其阻斷劑MK886與NOS抑制劑NG-硝基-L-精氨酸-甲酯(NG-nitro-L-arginine-methyl ester,L-NAME)可分別使FF與L-arg的上述作用得到阻斷(P＜0.05)。BBR具有與FF及L-arg相似的作用,可抑制AngⅣ誘導(dǎo)的VSMCs增殖,在10μmol·L
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