1、目的:胃癌作為最普遍的惡性腫瘤之一，發(fā)病率近年來不斷上升。然而，目前針對胃癌早期還沒有比較有效的診斷，監(jiān)測轉移情況和判斷預后的檢測方法。免疫治療也在胃癌的治療中顯示出光明的前景。但是，據(jù)相關報道，胃癌細胞可以通過多種機制來防止免疫系統(tǒng)產生有效的抗腫瘤免疫反應，從而逃避免疫監(jiān)視。
　　研究表明PD-L1能增加入抗原特異性T細胞克隆的凋亡并抑制CD4和CD8 T細胞的體外活化。并且PD-L1在包括胃癌在內的多個腫瘤中高表達。最新研究已

2、經表明，PD-1或PD-L1的抗體可緩解的PD-L1對細胞毒性T細胞的抑制作用，從而促進與激活細胞毒性T細胞消滅腫瘤細胞的能力。并對于腫瘤中斷PD1/PD-L1的信號通路對胃癌是一個有希望的治療策略。脫嘌呤/脫嘧啶內切核酸酶1(APE1)不僅能修復DNA的損傷還可作為氧化還原活性蛋白，激活許多轉錄因子，APE1表達可增強胃癌的發(fā)生。SNP是對癌癥易感性研究的重要的因子之一。之前的研究表明在PD-L1的幾個外顯子的基因多態(tài)性已被發(fā)現(xiàn)，并與

3、其自身免疫疾病相關。針對胃癌的PD-L1相關的SNP還鮮有報道。第一部分首先檢測了PD-L1和APE1，特別是PD-L1腫瘤免疫與107例胃癌患者之間的相關性。第二部分基于第一部分的臨床資料，采用PCR-CTPP法對PD-L1基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌易感性關系進行了研究;為以PD-L1為靶點的胃癌治療策略研究提供相關理論支持。
　　方法:本課題分為兩個部分。第一部分我們整理收集107例胃癌患者的組織標本采用免疫組化的方法對APE1

4、和PD-L1的表達情況進行染色。觀察這兩種基因在胃癌組織中的表達情況，并分析他們的表達水平與臨床病例特征、預后以及這兩種基因的相關性。第二部分，我們收集整理了141例健康對照人群以及101例胃癌患者的，外周血血清標本，并從中提取了DNA，運用PCR-CTPP(引物聚合酶鏈反應)技術來分析了PD-L1的三個位點rs4143185，rs2890658和rs17718883(rs4143185位點由上海Invitrogen公司采用測序技術進行

5、分析)單核苷酸多態(tài)性與胃癌易感性以及預后之間的關系。所有數(shù)據(jù)運用EXCEL表格登記，收集;使用SPSS19.0軟件對收集的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結果:胃癌組織標本107例中，管狀腺癌26例，粘液腺癌6例，印戒細胞癌22例，低分化癌例53例。PD-L1的陽性率為50.5％(54/107); APE1的陽性率為86.9％(93/107)。PD-L1與浸潤深度(OR=3.37; P=0.005)，淋巴結轉移(OR=2.68; P=0.

6、020)，腫瘤分化程度(OR=3.19; P=0.008)以及病理類型(x2=8.676; P=0.013)有顯著差異。同時，PD-L1在高分化癌，淋巴結轉移和深層浸潤腫瘤表達率更高。另外，Kaplan-Meier生存分析表明PD-L1的陽性表達與胃癌的較差的預后顯著相關(P＜0.05)。
　　APE1在癌旁組織弱表達或不表達。大約86.9％(93/107)胃癌組織APE1陽性表達。APE1在胃癌中的表達在淋巴結轉移(OR=3.2

7、6; P=0.037)，浸潤深度(OR=7.61;P=0.001)以及生存時間有顯著差異(OR=10.91;P=0.040)。APE1的陽性表達與胃癌的較差的預后顯著相關(P=0.035)。49.5％(53/107)的胃癌組織共同表達這兩個蛋白。Spearman rank相關分析顯示APE1與PD-L1正相關(r=0.336，P＜0.01)，PD-L1 and APE1共同表達的胃癌患者生存預后差(P=0.003)。腫瘤部位，浸潤深度，

8、淋巴結轉移，腫瘤分化程度以及病理類型與生存預后顯著相關。賁門區(qū)的腫瘤中位生存時間(22士2.42 months)較胃體部癌中位時間(45±3.86 months，P=0.003)短。管狀腺癌中位時間最長，為41個月，然而低分化癌的中位生存時間只有20士2.24月，(P=0.004)。浸潤深度是胃癌的一個預后影響因素(RR=19.91;95％ CI,:4.83-82.03;P=0.000)。
　　在rs17718883中與CC純合野

9、生基因型相比，雜合突變CG基因型與GG純合突變基因型以及CG（雜合突變）+GG（純合突變）基因型的個體患胃癌的風險顯著降低(校正OR=0.238;95％CI:0.12～0.49; P＜0.001);(校正OR=0.057;95％CI:0.007～0.45; P＜0.001);（校正OR=0.196;95％CI:0.10～0.38;P＜0.001）?？ǚ綑z驗計算后，我們發(fā)現(xiàn)，rs17718883位點的等位基因G相對于等位基因C而言顯著降低

10、了胃癌的發(fā)病風險(OR=0.210;95％CI:0.12～0.38; P＜0.001)。
　　rs17718883位點的CC基因型與CG基因型以及CG+GG基因型患者的中位生存時間分別為:22個月，56個月;差異有統(tǒng)計學意義(P=0.009); CG+GG的中位生存時間為56個月(CC vs.CG+GG P=0.014);但是CC vs.GG突變基因型未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學差異，而且中位時間20個月低于CC突變的22個月，我們認為是由于GG

11、突變只有1例，例數(shù)太少導致數(shù)據(jù)不均衡引起的。COX回歸模型用來分析rs17718883位點我們發(fā)現(xiàn)，該位點的突變基因型都是OS的有利因素，CG(HR.0.229，P=0.006)CG+GG(HR:0.266，P=0.007)差異有統(tǒng)計學意義，GG(HR:0.984，P=0.988)差異沒有統(tǒng)計學意義。
　　結論:第一部分:
　　1.在胃癌組織中PD-L1和APE1的陽性表達在浸潤深度，淋巴結轉移，病理類型，總生存時間中存在顯

12、著差異。PD-L1與APE1的表達都升高。
　　2.胃癌患者組織高表達PD-L1和APE1較低表達者預后差。
　　3.PD-L1與APE1的表達正性相關，對兩者的聯(lián)合檢測對胃癌的診斷以及預后的評估有一定價值。
　　第二部分:
　　1.PD-L1(rs17718883)位點與胃癌發(fā)病風險顯著相關，其等位基因G相能顯著降低胃癌發(fā)病風險。
　　2.rs17718883雜合突變CG基因型可能提示患者能獲得較好的預后