1、無論是在脊椎或無脊椎動物中,胰島素/胰島素樣生長因子信號系統(tǒng)調(diào)控著生物個體的代謝與生長發(fā)育。作為該系統(tǒng)中一種重要的效應因子,胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBPs)家族對維持體內(nèi)血糖平衡,促進細胞的增殖分化等生命過程發(fā)揮著至關重要的作用。昆蟲也具有胰島素樣肽,而目前對無脊椎動物IGFBPs的功能同系物少有報道。
　　 作為昆蟲先天性免疫系統(tǒng)中一個重要的組成部分,酚氧化酶原級聯(lián)反應在宿主抵御外源微生物侵染的過程中發(fā)揮著重要的作用。

2、其通過產(chǎn)生黑色素,以毒性的醌類物質(zhì)和活性氧、氮中間產(chǎn)物對微生物進行殺滅。但過度黑化會導致機體損傷,所以需要如絲氨酸蛋白酶抑制劑這樣的負調(diào)控因子對黑化反應進行精確控制。
　　 家蠶具有開放式血液循環(huán)系統(tǒng),血淋巴中的蛋白會參與新陳代謝,物質(zhì)能量轉(zhuǎn)運以及免疫防控。本文通過對家蠶血淋巴蛋白BmCP8的功能進行了初步分析,發(fā)現(xiàn)其可能是一種具有雙重功能的家蠶血淋巴堿性小分子量蛋白,即參與了兩種不同的生命進程:胰島素樣肽通路和黑化反應。主要的

3、研究結果如下:
　　 1.家蠶BmCP8蛋白的生物信息學分析
　　 根據(jù)BmCP8的氨基酸序列,通過Uniprot的UniprotKB數(shù)據(jù)庫進行BLASTP發(fā)現(xiàn)BmCP8與柞蠶真菌蛋白酶抑制劑AmFPI-1以及哺乳動物的IGFBPs的N端保守區(qū)域相似,其序列上都富含半胱氨酸。進行多重序列比對后發(fā)現(xiàn),BmCP8具有AmFPI-1的活性區(qū)域,而BmCP8的"GCGCCXXCV"序列與IGFBPsN端結構域中保守的"GCGCC

4、XXCA"序列相似。
　　 2.家蠶BmCP8蛋白的純化與富集
　　 為了大量富集BmCP8蛋白,本研究在原有純化策略的基礎上進行了改進,即將五齡三天的家蠶血液通過硫酸銨沉淀法,兩次凝膠過濾與一次離子交換層析的策略純化出單一的目的蛋白。
　　 3.不同時期高糖飼料喂養(yǎng)家蠶后表型和BmCP8基因表達的分析
　　 從三齡起和五齡起分別用含5%和20%葡萄糖的人工飼料喂養(yǎng)家蠶,于五齡三天對各處理組進行形態(tài)學分析

5、,以及調(diào)查其脂肪體中BmCP8基因和頭中BombyxinA2基因的表達情況。結果發(fā)現(xiàn),加糖飼料喂養(yǎng)的家蠶個頭小,發(fā)育遲緩。同時,長期喂食含糖飼料使得BombyxinA2和BmCP8基因表達水平也在各處理組中呈現(xiàn)出下降的趨勢。
　　 4.BmCP8蛋白對家蠶卵巢細胞生長情況的影響
　　 用不同濃度(0、0.5、1、5、10μg/孔)的BmCP8蛋白與處于對數(shù)生長期的卵巢細胞共培養(yǎng),用家蠶表皮蛋白CPR56作為蛋白對照。培養(yǎng)

6、48小時后,對卵巢細胞生長情況進行檢測發(fā)現(xiàn)BmCP8并不能促進其生長。
　　 5.BmCP8蛋白對酚氧化酶級聯(lián)反應的影響
　　 對五齡三天的家蠶幼蟲分別注射大腸桿菌(Eescherichiacoil)、白僵菌(Beauveriabassiana)、黑胸敗血芽孢桿菌(Bacillusbornbyseptieus)和對照(0.85%生理鹽水),選取5個時間點即1、3、6、12、24小時。通過熒光定量PCR檢測BmCP8的表達