1、目的：研究小分子非編碼RNA miR-210對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMMSCs)表達和分泌血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的影響，為骨組織工程血管化研究提供實驗數(shù)據(jù)。
　　方法：首先體外全骨髓液貼壁法培養(yǎng)小鼠 BMMSCs，通過構(gòu)建慢病毒載體Lenti-LacZ和 Lenti-miR-210，分別轉(zhuǎn)染小鼠 BMMSCs和人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)；MTT法檢測慢病毒載體對小鼠 BMMSCs增殖情況的影響；Lenti-miR-21

2、0/BMMSCs和 Lenti-LacZ/BMMSCs于轉(zhuǎn)染慢病毒載體后培養(yǎng)至第7d RT-PCR檢測VEGF mRNA基因表達，第14d Western blot檢測VEGF蛋白表達；通過PKH26紅色熒光染料對Lenti-miR-210/HUVEC和Lenti-LacZ/HUVEC進行染色后，進行24h Matrigel成管實驗，通過熒光顯微鏡觀察成管效果，統(tǒng)計兩組成管長度；構(gòu)建HyStem-HP凝膠緩釋系統(tǒng)，agomir-210和

3、agomir-NC與BMMSCs復合 HyStem-HP凝膠后行裸鼠皮下注射,7d后取標本進行10%中性福爾馬林固定，脫水后包埋，石蠟切片行CD31免疫熒光染色，檢測CD31陽性細胞含量。使使用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差形式呈現(xiàn)，t檢驗和方差分析處理實驗數(shù)據(jù)，檢驗水準取α=0.05。
　　結(jié)果：全骨髓液培養(yǎng)后5-7d，鏡下見部分細胞呈梭形或多角形，散在分布；傳代后貼壁細胞呈梭形旋渦狀生長，細胞形態(tài)隨傳

4、代培養(yǎng)逐漸一致；miR-210慢病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠BMMSCs和HUVEC，當MOI=10時，轉(zhuǎn)染效率最高，MTT法檢測病毒對BMMSCs增殖無影響，Lenti-miR-210和Lenti-LacZ兩組細胞培養(yǎng)第7d RT-PCR檢測VEGF mRNA基因表達結(jié)果，miR-210促進小鼠BMMSCs VEGF的表達（P＜0.01)；第14d Western blot檢測兩組細胞VEGF蛋白表達，miR-210組VEGF蛋白表達明顯高于對照

5、組，與 RT-PCR結(jié)果一致；Matrigel成管實驗24h結(jié)果 Lenti-miR-210組與 Lenti-LacZ相比，環(huán)形管狀結(jié)構(gòu)明顯，端端接觸多，管壁更完整；統(tǒng)計小管長度后比較兩組小管長度，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；agomir-210和agomir-NC分別與BMMSCs復合HyStem-HP凝膠緩釋系統(tǒng)裸鼠皮下注射7d后標本CD31免疫熒光染色結(jié)果統(tǒng)計分析顯示agomir-210組CD31陽性細胞含量明顯高于agom