1、目的：
　　研究熊果酸(Ursolic acid，UA) Pluronic F127納米膠束(FUP)對(duì)大腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，并從分子水平探討其作用機(jī)制，為熊果酸的進(jìn)一步研發(fā)提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，并為改進(jìn)熊果酸劑型提供新的思路。
　　方法：
　　1.熊果酸F127納米膠束(FUP)的制備及表征:Pluronic F127作為納米載體，PEI改變電性，運(yùn)用自組裝法制備載UA的納米膠束FUP。采用透射電子顯微鏡(TEM)

2、觀察膠束形貌;采用Nano ZS納米粒度及Zeta電位儀測(cè)定分析其粒徑大小、多分散性指數(shù)(PDI)以及Zeta電位等表征;采用傅里葉紅外光譜測(cè)定FUP的紅外吸收情況;采用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）檢測(cè)計(jì)算其載藥量、包封率及體外藥物釋放率。
　　2.FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用:選用大腸癌細(xì)胞HCT116及HCT-8作為研究對(duì)象;采用MTT法評(píng)價(jià)FUP

3、對(duì)大腸癌細(xì)胞活力的影響;通過(guò)倒置顯微鏡觀察FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞形態(tài)的影響;通過(guò)集落形成實(shí)驗(yàn)觀察FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞集落形成能力的影響;通過(guò)DAPI染色以及Annexin V/PI染色觀察FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞凋亡的影響;進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞DNA含量，研究FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞周期的影響;通過(guò)Western Blot檢測(cè)FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因Fas、FasL及活化的caspase-8、caspase-3蛋白水平的影響。
　　結(jié)果：

4、r>　　1.FUP的制備及表征:運(yùn)用自組裝法成功制備了納米膠束FUP，采用TEM結(jié)果顯示膠束成圓球狀，大小較均勻;Nano ZS納米粒度及Zeta電位儀測(cè)得其平均粒徑為100.50±0.38 nm，PDI為0.134，Zeta電位為20.1±0.41 mV;紅外光譜圖顯示FUP中UA的存在;HPLC測(cè)定計(jì)算FUP的載藥量為15.2±0.12％，包封率為36.64±0.26％; FUP的體外藥物釋放在初期(24h)較快，然后進(jìn)入緩釋階段，

5、在第6天時(shí)，F(xiàn)UP的UA累計(jì)釋放量為71.7％。
　　2.FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制:經(jīng)MTT法驗(yàn)證FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞HCT116及HCT-8的活力具有明顯的抑制作用(P＜0.05)，同等劑量(≤20μM)的UA及F127則無(wú)明顯抑制作用;細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯示，與對(duì)照組比較，F(xiàn)127、UA均未明顯降低細(xì)胞密度，而FUP可明顯減少細(xì)胞數(shù)量;集落形成實(shí)驗(yàn)顯示F127對(duì)細(xì)胞集落形成能力無(wú)抑制作用，UA及FUP對(duì)細(xì)胞集落形成能力的

6、均有抑制作用(P＜0.05)，但FUP對(duì)HCT116及HCT-8細(xì)胞集落形成能力的抑制作用更強(qiáng);DAPI染色以及AnnexinV/PI染色提示F127、UA對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響，而FUP可增加細(xì)胞凋亡，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，表明FUP對(duì)HCT116及HCT-8細(xì)胞凋亡的具有促進(jìn)作用;細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)127、UA對(duì)細(xì)胞周期無(wú)影響，而FUP顯著增加G1期細(xì)胞的比例，降低S期細(xì)胞的比例，使細(xì)胞周期阻滯于G1期，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、差異(P＜0.05);WesternBlot檢測(cè)結(jié)果表明FUP能顯著上調(diào)Fas、FasL及活化的caspase-8、caspase-3蛋白水平表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　運(yùn)用自組裝法成功制備了納米膠束FUP，其粒徑大小適中，分散性、穩(wěn)定性好;FUP對(duì)大腸癌細(xì)胞活力、集落形成能力、增殖能力的抑制作用和對(duì)凋亡的促進(jìn)作用優(yōu)于相同劑量的UA，說(shuō)明其具有提高UA生物利用度的作用;FUP促進(jìn)HCT116、HCT-8細(xì)胞凋亡的作用可能與調(diào)控F