1、目的：
　　腫瘤微環(huán)境由腫瘤細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)共同構(gòu)成，但目前關(guān)于腫瘤微環(huán)境的研究多注重模擬微環(huán)境中生物化學(xué)因素，忽略真實(shí)體內(nèi)生物力學(xué)因素影響，故其結(jié)果的可靠性有待證實(shí)。因此，如果能夠利用力學(xué)模型加入生物化學(xué)因素的刺激，不但能夠進(jìn)一步模擬體內(nèi)的微環(huán)境，觀察腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的過(guò)程，還將進(jìn)一步準(zhǔn)確揭示生物化學(xué)及生物力學(xué)因素對(duì)腎透明細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，更主要的是挑戰(zhàn)傳統(tǒng)腫瘤微環(huán)境的觀點(diǎn)限制，為進(jìn)一步腫瘤治療提出新的觀點(diǎn)和手

2、段。
　　本研究擬借助力學(xué)模型構(gòu)建體內(nèi)腫瘤微環(huán)境，研究腎透明細(xì)胞癌微環(huán)境中淋巴細(xì)胞與腫瘤生長(zhǎng)介導(dǎo)的壓力對(duì)腫瘤細(xì)胞作用的分子機(jī)制，本研究旨在為腎透明細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移及治療尋找新的治療方向，本研究分為以下三部分。
　　方法:
　　1.應(yīng)用PCR Array技術(shù)篩選腫瘤微環(huán)境中關(guān)鍵變化組分以及其對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用
　　通過(guò)自行設(shè)計(jì)腫瘤微環(huán)境相關(guān)成分PCR Array，篩選正常腎組織與腎腫瘤組織微環(huán)境差異成分CD4;通過(guò)免疫組化

3、、臨床隨訪、共聚焦技術(shù)以及腫瘤功能學(xué)實(shí)驗(yàn)等進(jìn)一步篩選關(guān)鍵變化組分;為明確微環(huán)境中影響腎癌進(jìn)展的關(guān)鍵組分以及進(jìn)一步可能的機(jī)制提供依據(jù)。
　　2.借助力學(xué)模型運(yùn)用基因表達(dá)譜技術(shù)篩選生物化學(xué)及生物力學(xué)聯(lián)合作用下微環(huán)境中促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展的關(guān)鍵蛋白
　　基于力學(xué)模型構(gòu)建腫瘤微環(huán)境模型，運(yùn)用全基因表達(dá)譜技術(shù)驗(yàn)證生物力學(xué)因素對(duì)腫瘤影響;在此基礎(chǔ)上，加入微環(huán)境生物化學(xué)成分變化因素IL-6，進(jìn)一步構(gòu)建仿生腫瘤微環(huán)境，再現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)

4、展過(guò)程，為后續(xù)微環(huán)境影響腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展分子機(jī)制提供技術(shù)平臺(tái)及理論依據(jù)。
　　3.腫瘤微環(huán)境中促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展的關(guān)鍵分子及通路驗(yàn)證性研究
　　應(yīng)用生物力學(xué)平臺(tái)，驗(yàn)證基因表達(dá)譜芯片篩選出的β-catenin、CD44為代表的關(guān)鍵蛋白在腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展中的作用，進(jìn)一步證實(shí)調(diào)控關(guān)鍵蛋白的信號(hào)通路，以此為治療腎透明細(xì)胞癌提供新的思路及理論基礎(chǔ)。
　　結(jié)果:
　　1.應(yīng)用PCR Array技術(shù)篩選腫瘤微環(huán)境中關(guān)鍵變化組

5、分以及其對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用
　　通過(guò)自行設(shè)計(jì)的腫瘤微環(huán)境PCR Array，我們對(duì)比正常腎組織與腎癌組織發(fā)現(xiàn)微環(huán)境中CD4及上皮間質(zhì)化(epithelial to mesenchymal transition EMT)組分變化明顯;進(jìn)一步利用免疫組化我們發(fā)現(xiàn)與低級(jí)別腎癌相比，高級(jí)別中CD4及上皮間質(zhì)化標(biāo)記物α-SMA表達(dá)明顯增高，并且兩者存在正相關(guān)性，因而我們進(jìn)一步研究?jī)烧咴?腎癌中的關(guān)系，體外流式細(xì)胞儀提取人原代CD4(+)T細(xì)胞

6、與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，通過(guò)ELISA測(cè)定培養(yǎng)液中IL-6含量變化顯著增高。然后體外IL-6刺激腎癌腫瘤細(xì)胞，通過(guò)共聚焦顯像及蛋白水平變化發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)化現(xiàn)象，并且促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移。為明確微環(huán)境中影響腎癌進(jìn)展的關(guān)鍵組分以及進(jìn)一步可能的機(jī)制提供依據(jù)。
　　2.借助力學(xué)模型運(yùn)用基因表達(dá)譜技術(shù)篩選生物化學(xué)及生物力學(xué)聯(lián)合作用下微環(huán)境中促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展的關(guān)鍵蛋白
　　腫瘤微環(huán)境中不僅存在生物化學(xué)因素，還有生物力學(xué)發(fā)揮作用

7、，我們體外構(gòu)建生物力學(xué)微環(huán)境模型，實(shí)現(xiàn)力學(xué)和化學(xué)連續(xù)動(dòng)態(tài)刺激腫瘤細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞活性及遷移實(shí)驗(yàn)，明確腫瘤細(xì)胞微環(huán)境壓力范圍;在此基礎(chǔ)上，我們通過(guò)基因表達(dá)譜芯片對(duì)IL-6刺激組、生物力學(xué)刺激組及聯(lián)合作用組進(jìn)行差異基因的分析定量，同時(shí)根據(jù)GO(Gene Ontology)分析挑選出功能與上皮間質(zhì)化及生物力學(xué)相關(guān)的分子，在腎癌細(xì)胞中進(jìn)一步篩選出β-catenin關(guān)鍵蛋白，為后續(xù)微環(huán)境影響腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展分子機(jī)制提供技術(shù)平臺(tái)及理論依據(jù)。
　

8、　3.腫瘤微環(huán)境中促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展的關(guān)鍵蛋白及通路研究
　　選取關(guān)鍵蛋白β-catenin，借助生物力學(xué)平臺(tái)進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)β-catenin能有效影響腎癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及細(xì)胞于性，而且與腎癌預(yù)后相關(guān)。同時(shí)，我們通過(guò)全基因表達(dá)譜芯片KEGG通路篩選出PI3K-Akt信號(hào)通路，基于蛋白水平驗(yàn)證腫瘤微環(huán)境通過(guò)物理化學(xué)作用調(diào)控Akt/G SK-3β/β-catenin信號(hào)通路影響腎癌進(jìn)展，以此為治療腎透明細(xì)胞癌提供新的思路及理論基礎(chǔ)

9、。
　　結(jié)論:
　　1.本研究成功通過(guò)自行設(shè)計(jì)的腫瘤微環(huán)境PCR Array，篩選正常腎組織與腎腫瘤組織微環(huán)境差異組分CD4;并且通過(guò)免疫組化、臨床隨訪、共聚焦技術(shù)以及腫瘤功能學(xué)實(shí)驗(yàn)等進(jìn)一步篩選出CD4(+)T細(xì)胞分泌因子IL-6及其對(duì)腫瘤的影響。
　　2.借助生物力學(xué)平臺(tái)，明確合適的壓力水平促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)，利用基因表達(dá)譜芯片證明壓力存在仍能進(jìn)一步加強(qiáng)IL-6作用，使腫瘤細(xì)胞惡性程度進(jìn)一步升高，但是單純的壓力