1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬GV期卵母細(xì)胞玻璃化冷凍保存的研究姓名：馬成勛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：章孝榮20090601蔗糖溶液中處理5 m i n ，一步脫除冷凍保護(hù)劑) 脫除冷凍保護(hù)劑進(jìn)行解凍。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三步法、二步法的存活率分別為5 3 ．4 9 - a ：3 ．5 7 ％、5 1 ．6 8 士1 ．6 7 ％、和一步法3 9 ．6 8 0 ／甜：4 ．2 3 ％差異顯著伙0 ．0 5 ) ，三步法的成熟

2、率1 0 ．0 3 + 0 ．6 7 ％、和二步法及一步法6 ．7 + 0 ．1 3 ％、2 ．1 5 士1 ．8 4 ％差異顯著( P < 0 ．0 5 ) 。說(shuō)明三步法的解凍效果要優(yōu)于二步法和一步法。實(shí)驗(yàn)四：為了探討利用一種作者自制的新型玻璃化冷凍載體C r y o s h e e t 冷凍保存豬卵母細(xì)胞的可行性，以C r y o s h e e t 法、玻璃微管法( G l a s s m i c r o p i p e t

3、 t e ，G M P )法和開(kāi)放式拉長(zhǎng)麥管法( O r I e l l p u l l e ds t r a w ，O P S ) 對(duì)豬G V 期卵母細(xì)胞進(jìn)行玻璃化冷凍保存。豬G V 期卵母細(xì)胞在以T C M l 9 9 為基礎(chǔ)液含1 0 ％、2 0 ％和3 0 ％的E G 中分別處理3 m i n 、2 m i n 和3 0 s ，解凍時(shí)用0 ．5 M 、0 ．2 5 M 和0 M 的蔗糖液分別處理5 m i n 。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，存活率

4、分別為5 6 ．9 2 士2 ．1 9 ％、5 1 ．7 7 士0 ．9 6 ％、5 2 ．4 8 士1 ．3 3 ％，成熟率分別為1 1 ．1 3 士1 ．1 3 ％、8 ．0 2 + 0 ．7 8 ％、6 ．4 士1 ．2 7 ％，C r y o s h e e t 法、G M P 法及O P S 法之間差異均不顯著p 0 ．0 5 ) 。結(jié)果表明這種新型C r y o s h e e t 和進(jìn)C I 載體相比不僅安全、可靠、成本低

5、、制作簡(jiǎn)單，還可以用來(lái)有效地冷凍保存豬G V 期卵母細(xì)胞。綜上所述，玻璃化冷凍保存豬G V 期卵母細(xì)胞時(shí)，以D P B S 為基礎(chǔ)液能取得與T C M l 9 9 基礎(chǔ)液相似的效果，在1 0 ％、2 0 ％E G 平衡液中分別處理3 m i n 、2 m i n后，再移入3 0 ％E G 中處理3 0 s ，采用三步法解凍，可以獲得理想的存活率和成熟率。同時(shí)，C r y o s h e e t 是一種較好的新型玻璃化冷凍載體，可以用來(lái)冷