幼齡茶樹在干旱脅迫下基因表達差異分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、茶樹(Camellia sinensis(L.) O.Kuntze)是我國重要的經(jīng)濟作物之一,不僅栽培歷史悠久,而且分布廣泛。已有研究表明,我國西南部是茶樹的起源中心,孕育了豐富的茶樹種質資源,為優(yōu)良品種的選育奠定了優(yōu)良的基礎。干旱是限制世界作物生產(chǎn)的主要環(huán)境因子之一,全球干旱、半干旱地區(qū)約占土地總面積的36%,占耕地面積的43%。我國干旱和半干旱地區(qū)面積約占全國土地面積的1/2,同時,隨著全球溫室效應的增強,對抗旱品種的選育將是未來品

2、種的選育的一個重要方面。
   傳統(tǒng)的茶樹品種選育主要是通過系統(tǒng)選育和單株選育,但是有遺傳背景復雜、遺傳不穩(wěn)定、選育時間較長、選育盲目性較大等缺陷,同時抗旱指標的選擇多是以環(huán)境性狀為主。分子育種直接在分子水平選育,通過對遺傳物質DNA的篩選進行品種選育,能有效避免上述缺點。DD-PCR(差異顯示PCR技術,或DDRT-PCR)有操作簡便、靈敏性良好和效率較高的優(yōu)點,本研究首次將技術成熟的差異顯示PCR技術應用于茶樹干旱環(huán)境下的差

3、異表達基因的篩選。本實驗意圖將在干旱環(huán)境下有表達變化的基因片段作為以后抗旱品種研究和選育的一個篩選指標,對干旱品種的選育做出一定的貢獻。通過實驗得到了以下實驗結果:
   1、幼齡茶苗利用試劑盒提取RNA的最佳部位是嫩葉和幼根,因為積累的次生產(chǎn)物少,對提取到的RNA污染少,但根部RNA保存較困難,降解較快,說明應用該試劑盒提取的RNA中有其他雜質,影響根部RNA的保存。
   2、PCR反應時用Mixmixture的擴增

4、效果要好于傳統(tǒng)的Taq酶體系;電泳條件是120mv,電泳1h左右;電泳所用凝膠濃度約為1.5%分離效果較好;取材部位為嫩葉時,退火溫度為45℃時,擴增條帶的假陽性較低,條帶的重復性較好,取材部位為幼根時,根據(jù)處理時間,應適當降低退火溫度;PCR反應參數(shù)以普通PCR反應參數(shù)為對照即可。
   3、經(jīng)過PCR反應后,發(fā)現(xiàn)條帶有上調表達、下調表達、常量表達三種表達量的變化;發(fā)現(xiàn)部分條帶對錨定引物有一定的兼并性;通過引物篩選,確定了進行

5、不同研究所需要的引物組合,以幼根為材料進行試驗,需要重新確定脅迫劑濃度和脅迫處理時間。
   4、根據(jù)測序結果可以看出,茶苗在干旱脅迫處理下,有很多基因條帶表達產(chǎn)生變化,部分條帶的變化趨勢和有研究者[94、951報道的酶活變化趨勢相近。
   5、確定應用DDRT-PCR技術在茶樹抗旱分子機制的探討中是可行的,在所選擇的茶樹品種福鼎大白茶幼苗上取得的較好的實驗效果,可以應用該方法對其它茶樹品種及不同發(fā)育期茶樹品種進行相關

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