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1、果糖-1,6-二磷酸醛縮酶(FBA)是一類(lèi)重要的糖代謝酶,該酶既參與了糖酵解和糖異生過(guò)程,同時(shí)又參與了磷酸戊糖途徑和卡爾文循環(huán),對(duì)植物體正常的生命活動(dòng)具有極其重要的作用。此外,動(dòng)物和細(xì)菌中的研究還發(fā)現(xiàn)果糖-1,6-二磷酸醛縮酶能與細(xì)胞骨架結(jié)合,參與微管的聚合、細(xì)胞的內(nèi)吞和膜泡運(yùn)輸。同時(shí)還參與了病原菌的侵染過(guò)程。但植物中關(guān)于果糖-1,6-二磷酸醛縮酶的研究相對(duì)較落后。目前的研究發(fā)現(xiàn)主要集中于果糖-1,6-二磷酸醛縮酶能夠影響植株的生長(zhǎng)和生
2、物量的積累,并參與植物體逆境脅迫下的響應(yīng)。
擬南芥基因組中含有8個(gè)果糖-1,6-二磷酸醛縮酶編碼基因,但其生物學(xué)功能及作用機(jī)制尚不清楚。因此本研究以擬南芥為材料,在前期對(duì)果糖-1,6-二磷酸醛縮酶基因家族的系統(tǒng)進(jìn)化和表達(dá)模式分析的基礎(chǔ)上,對(duì)其中兩個(gè)胞質(zhì)定位的果糖-1,6-二磷酸醛縮酶基因進(jìn)行了初步功能分析,主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
(1)用AtFBA6基因的全長(zhǎng)核苷酸序列構(gòu)建超表達(dá)和GFP融合蛋白的載體,轉(zhuǎn)化擬南芥
3、后獲得轉(zhuǎn)基因株系,表達(dá)量檢測(cè)說(shuō)明轉(zhuǎn)基因植株可用。
(2)激光共聚焦掃描顯微鏡觀察結(jié)果表明,AtFBA6編碼的蛋白定位于胞質(zhì)。
(3)從SALK突變體庫(kù)訂購(gòu)AtFBA6的T-DNA插入突變體(SALK014964C)。對(duì)fba6突變體和多個(gè)AtFBA6超表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行表型分析,發(fā)現(xiàn)在正常生長(zhǎng)條件下,突變體與野生型沒(méi)有明顯差異,而超表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系比野生型生長(zhǎng)速度加快,植株鮮重增加。
(4)顯微觀
4、察結(jié)果表明AtFBA6超表達(dá)株系中細(xì)胞的數(shù)目沒(méi)有增加,但單個(gè)細(xì)胞體積明顯增大。生化分析結(jié)果表明AtFBA6超表達(dá)株系中總糖和ATP含量高于野生型。說(shuō)明,AtFBA6超表達(dá)后可以促進(jìn)植物糖的合成和能量供應(yīng),使植株生長(zhǎng)加快。
(5)我們前期的研究發(fā)現(xiàn)AtFBA8在植物花中的表達(dá)量最高。表型分析發(fā)現(xiàn)AtFBA8兩個(gè)T-DNA插入突變體fba8-1和fba8-2的果莢結(jié)實(shí)率明顯低于野生型。
(6)花形態(tài)分析表明,fb
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