1、目的：
　　心肌缺血/再灌注損傷是指由冠狀動脈血液供應(yīng)不足繼而復(fù)灌引起的心肌細胞不可逆損傷，目前尚無有效的治療方法。積雪草酸是一種來源于熱帶藥用植物積雪草的五環(huán)三萜類化合物，具有廣泛的生物活性。在本研究中，我們通過體外建立大鼠 H9c2心肌細胞氧糖剝奪/再灌注（OGD/R）損傷模型，來模擬體內(nèi)心肌缺血再灌注損傷，觀察積雪草酸對H9c2細胞OGD/R損傷的保護作用，并在此基礎(chǔ)上探討其心肌保護作用的分子機制，以期為治療心肌缺血/再灌注

2、損傷提供新的潛在藥物。
　　實驗方法：
　　1.心肌細胞OGD/R損傷模型的制備：使用不同濃度的積雪草酸（0.1,1,10,100μM）預(yù)處理體外培養(yǎng)的H9c2細胞4 h，然后缺氧1 h，復(fù)氧12 h制備心肌細胞損傷模型，通過MTT和LDH漏出率檢測觀察不同濃度積雪草酸對H9c2細胞損傷的保護作用。
　　2.采用Hoechst33258熒光染料染色，觀察積雪草酸（10μM）對OGD/R損傷模型心肌細胞凋亡的影響；檢測各

3、組心肌細胞Caspase-3和Caspase-9活性；Western blot方法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2的表達。
　　3.使用2′,7′-二氯熒光素（dichlorofluorescein，DCF）檢測胞內(nèi)活性氧（ROS）含量；應(yīng)用Fluo-3 AM熒光探針檢測細胞內(nèi)鈣濃度；應(yīng)用JC-1染料測定心肌細胞線粒體膜電位，以此評價積雪草酸對OGD/R損傷后心肌細胞線粒體功能的影響。
　　4.采用Western blot

4、方法分析OGD/R處理后Akt、磷酸化Akt、GSK-3β、磷酸化GSK-3β和HIF-1α等蛋白的表達變化以及積雪草酸的干預(yù)作用；并結(jié)合用Akt抑制劑MK2206和HIF-1α抑制劑2-ME，試圖闡明積雪草酸的心肌細胞保護作用的可能分子機制。
　　實驗結(jié)果：
　　1.0.1-10μM積雪草酸對正常條件下H9c2細胞活力沒有影響，但可有效對抗OGD/R誘導(dǎo)的心肌細胞損傷，并呈濃度依賴性。
　　2.10μM積雪草酸可明顯

5、減少OGD/R損傷誘導(dǎo)的H9c2細胞凋亡，降低細胞Caspase-3和Caspase-9活性，阻止缺氧條件下Bax上調(diào)和Bcl-2下調(diào)。
　　3.10μM積雪草酸可顯著減少OGD/R損傷誘導(dǎo)的活性氧過量產(chǎn)生，抑制線粒體膜電位降低，阻止鈣離子的釋放，有效改善缺氧條件下的線粒體功能。
　　4.積雪草酸可顯著上調(diào)OGD/R損傷后的磷酸化Akt和磷酸化GSK-3β水平，增加HIF-1α表達；使用Akt抑制劑MK2206和HIF-1α