1、第一部分慢性心力衰竭與心肌細(xì)胞異常的鈣循環(huán)
　　 目的：心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)的鈣循環(huán)異常是心力衰竭發(fā)病的主要原因之一，但其確切機(jī)理和相關(guān)分子機(jī)制還不甚清楚，本實(shí)驗(yàn)以大鼠慢性心衰模型作為研究對(duì)象，在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平對(duì)心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)鈣瞬變、肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣容量以及鈣調(diào)控相關(guān)蛋白表達(dá)的變化進(jìn)行了研究，從而更深入地了解心衰的分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 （1）實(shí)驗(yàn)分組：28只雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組，假手術(shù)組（n=10）和心衰組（

2、n=18）；（2）慢性心衰模型的建立：心衰組大鼠行冠狀動(dòng)脈左前降支永久性結(jié)扎，假手術(shù)組大鼠除未結(jié)扎冠脈外，其余手術(shù)步驟均同心衰組。4周后分別觀(guān)察各組動(dòng)物存活率和心功能各項(xiàng)指標(biāo)；（3）心肌細(xì)胞L-型鈣電流、胞漿內(nèi)鈣瞬變和肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣容量的測(cè)定：采用常規(guī)酶解法分離心室肌細(xì)胞，F(xiàn)luo-3/AM 負(fù)載心肌細(xì)胞，運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗-激光掃描共聚焦顯微鏡聯(lián)機(jī)技術(shù)同步記錄各組大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣電流和胞漿內(nèi)鈣瞬變（即鈣誘導(dǎo)鈣瞬變）；利用咖啡因誘導(dǎo)鈣瞬變

3、的方法，間接記錄肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣容量（即咖啡因誘導(dǎo)鈣瞬變）的變化；同時(shí)利用Fluo-5N/AM 負(fù)載心肌細(xì)胞，直接記錄肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣容量的變化；（4）鈣調(diào)控蛋白Mrna 轉(zhuǎn)錄量的檢測(cè)：提取各組大鼠心肌組織總RNA，采用Real-time quantitative RT-PCR 方法檢測(cè)鈣調(diào)控蛋白Mrna的轉(zhuǎn)錄量；（5）鈣調(diào)控蛋白表達(dá)的測(cè)定：將各組大鼠左室心肌組織的膜蛋白提取后，采用Western-blot 法測(cè)定鈣調(diào)控蛋白的表達(dá)水平，并進(jìn)行蛋白表

4、達(dá)半定量分析；（6）
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：利用SPSS11.5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）表示，兩組間均數(shù)的比較采用t 檢驗(yàn), 率的比較采用Fisher’s Exact 檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：慢性心衰大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)鈣循環(huán)異常主要是由與鈣釋放和鈣回?cái)z相關(guān)的鈣調(diào)控蛋白表達(dá)的異常所引起。具體如下：
　　 （1）慢性心衰大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道（DHPR）表達(dá)下調(diào)

5、，造成鈣誘導(dǎo)鈣釋放（CICR）過(guò)程出現(xiàn)異常，最終導(dǎo)致心肌興奮-收縮耦聯(lián)（ECC）障礙，心肌收縮力下降。
　　 （2）慢性心衰大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)FKBP12.6表達(dá)下調(diào)，使其對(duì)RyR2的穩(wěn)定作用減弱，導(dǎo)致RyR2在心肌細(xì)胞舒張期泄漏過(guò)多的Ca2+，使肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣容量降低，從而引起ECC 過(guò)程中所需要的鈣釋放量減少，最終導(dǎo)致心肌收縮力降低。
　　 （3）慢性心衰大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)鈣泵（SERCA2a）表達(dá)下調(diào)，致ECC 結(jié)束后鈣回?cái)z功

6、能障礙，導(dǎo)致肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣容量減少，最終造成心肌收縮力下降。
　　 第二部分氧化苦參堿對(duì)慢性心衰大鼠心肌保護(hù)作用機(jī)制的研究
　　 目的：氧化苦參堿（Oxymatrine, OMT）是從豆科槐屬植物苦豆子提取的氧化生物堿，屬于四環(huán)的喹嗪啶類(lèi)，具有抗炎、抗過(guò)敏、保肝、抗病毒及抗寄生蟲(chóng)等多方面藥理作用，是臨床上常用的治療肝炎的藥物。本實(shí)驗(yàn)以慢性心衰大鼠作為模型，在先前研究的基礎(chǔ)上探討氧化苦參堿對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子，鈣通道及鈣調(diào)節(jié)相關(guān)

7、蛋白的影響，以期獲得其心臟保護(hù)作用的機(jī)制，并為此藥在臨床上的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論支持。
　　 方法：
　　 （1）實(shí)驗(yàn)分組：60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為五組，假手術(shù)組（n=12）、心衰組（n=12）、低劑量OMT 干預(yù)組（n=12）（25mg/kg, qd）、中劑量OMT 干預(yù)組（n=12）（50mg/kg, qd）和高劑量OMT 干預(yù)組（n=12）（100mg/kg, qd）；（2）心衰模型的建立：心衰組和藥物干預(yù)組大

8、鼠行冠狀動(dòng)脈左前降支永久性結(jié)扎，假手術(shù)組大鼠除未結(jié)扎冠脈外，其余手術(shù)步驟均同心衰組。4周后分別檢測(cè)各組動(dòng)物存活率和心功能各項(xiàng)指標(biāo)；（3）心肌細(xì)胞L-型鈣電流、胞漿內(nèi)鈣瞬變和肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣容量的測(cè)定：采用常規(guī)酶解法分離心室肌細(xì)胞，F(xiàn)luo-3/AM 負(fù)載心肌細(xì)胞，運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗-激光掃描共聚焦顯微鏡聯(lián)機(jī)技術(shù)同步記錄各組大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣電流和胞漿內(nèi)鈣瞬變；利用咖啡因誘導(dǎo)鈣瞬變的方法，間接記錄肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣容量；（4）透射電子顯微鏡形態(tài)學(xué)觀(guān)察：

9、各組大鼠心室肌組織被切成1mm3的小塊后，經(jīng)固定、脫水、包埋、修塊、切片、染色等處理后于電鏡下觀(guān)察并拍照；（5）鈣調(diào)控蛋白Mrna 轉(zhuǎn)錄量的檢測(cè)：提取各組大鼠心肌組織總RNA，采用Real-time quantitative RT-PCR 方法檢測(cè)鈣調(diào)控蛋白Mrna的轉(zhuǎn)錄量；（6）鈣調(diào)控蛋白表達(dá)的測(cè)定：將各組大鼠左室心肌組織的膜蛋白提取后，采用Western-blot 法測(cè)定鈣調(diào)控蛋白的表達(dá)水平，并進(jìn)行蛋白表達(dá)半定量分析；（7）統(tǒng)計(jì)學(xué)分

10、析：采用SPSS11.5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）表示，各組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間兩兩比較時(shí)用LSD 法。P<0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：氧化苦參堿（OMT）對(duì)慢性心衰大鼠的心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，而這種保護(hù)作用表現(xiàn)在大鼠心功能的改善。具體如下：
　　 （1）在氧化苦參堿（OMT）的干預(yù)下，慢性心衰大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道（DHPR）表達(dá)上調(diào)，促