1、研究背景：二十五味珊瑚丸是傳統(tǒng)藏藥,在公元18世紀由藏醫(yī)學(xué)創(chuàng)使人宇拓.元丹貢布創(chuàng)制,收載于藏醫(yī)著名經(jīng)典著作《四部醫(yī)典》,至今已有一千二百多年的臨床應(yīng)用歷史,是藏醫(yī)名貴珍寶藥品,1997年被國家衛(wèi)生部批準為國家中藥保護品種,目前《中國藥典》(2015版)收載。二十五味珊瑚丸具有清熱定驚、開竅通絡(luò)、止痛等功效,用于治療“白脈病”,癥見神志不清,身體麻木,頭暈?zāi)肯?腦部疼痛,血壓不調(diào),頭痛、癲癇及各種神經(jīng)性疼痛,現(xiàn)代臨床上主要用于腦血管和腦神

2、經(jīng)疾病,如癲癇[1]、腦中風(fēng)[2]、偏頭痛[3]等。該處方雖然已有上千年的歷史，但是，到目前為止，對藏藥二十五味珊瑚丸只有西紅花、紅花主要成分的薄層色譜鑒別以及烏頭堿、硫化汞、馬兜鈴酸A的含量測定，對于毒理學(xué)研究和質(zhì)量標準研究所涉及的相關(guān)論文較少，為了完善其相關(guān)的質(zhì)量評價標準以及安全性評價提供一定的依據(jù)。
　　研究目的：對經(jīng)典藏藥二十五味珊瑚丸進行急性、亞急性毒性反應(yīng)的初步研究，檢測其藥物的安全性；測定二十五味珊瑚丸中的主要指標成

3、分羥基紅花黃花素A、馬兜鈴酸A、重金屬及硫化汞的含量，形成比較規(guī)范的安全性評價模式，為藏藥二十五味珊瑚丸的質(zhì)量評價提供一個參考，也為臨床安全合理的用藥提供一定的依據(jù)。
　　研究方法：1.急性毒性實驗：按最大耐受量（MTD）測定法，分別采用昆明種小鼠和SD大鼠各20只，雌雄各半，灌胃給藥37.25％二十五味珊瑚丸CMC混懸液，一日三次（總?cè)萘繛?20ml/Kg），總劑量為44.70g/Kg（相當(dāng)于原生藥44.70g，為臨床成人擬推薦

4、用藥劑量（1g/d）的2682倍。）。2.亞急性毒性實驗：實驗采用SD大鼠80只，雌雄各半，區(qū)分性別、隨機分為對照組及二十五味珊瑚丸0.1852g/kg、0.3704g/kg和0.7408g/kg劑量組（分別為成人臨床使用量的25倍，50倍，100倍），連續(xù)給藥30天，停藥24小時后分別取樣進行血液學(xué)、血液生化學(xué)及病理組織學(xué)檢查。3.采用《中國藥典》2010版一部附錄重金屬檢查法和硫氰酸銨滴定法分別測定重金屬總量和硫化汞的含量；采用一般

5、鑒別試驗對可溶性汞鹽進行了檢查。4.采用HPLC法測定馬兜鈴酸的含量,色譜柱：Kromasil C18（4.6×200mm）；流動相：甲醇-0.05%冰醋酸（62：38）；檢測波長：250nm；柱溫：30℃；流速：1mL/min。5.采用色譜條件為Agilent Polaris NH2柱(250mm×4.6 mm，5μm)；甲醇26%-乙腈2%-磷酸水72%(PH=2.5)作為流動相；流速1.0 m L/min；柱溫25℃；檢測波長：4

6、03nm;進樣體積：10μL進行檢測，精密制備對照品和供試品溶液，并通過線性關(guān)系考察、精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性實驗以及加樣回收率試驗后進行樣品檢測并得出結(jié)果。
　　研究結(jié)果：1.急性毒性試驗：小鼠、大鼠分別灌胃二十五味珊瑚丸44.7g/kg，相當(dāng)于臨床用藥量的2682倍，動物未見嚴重毒性反應(yīng)，亦無動物死亡。實驗結(jié)果提示，二十五味珊瑚丸無明顯急性毒性反應(yīng)，二十五味珊瑚丸給小鼠、大鼠灌服的最大耐受量均為44.7g/kg。2.亞急性毒性實

7、驗：二十五味珊瑚丸30天連續(xù)給藥對大鼠免疫功能及肝、腎、肺組織均有不同程度的影響和損害，可引起毒性反應(yīng)，呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性，主要毒性靶器官為肝、腎、肺，提示二十五味珊瑚丸不宜長期大量服用。3.二十五味珊瑚丸中重金屬總量達200～225ppm；硫化汞平均回收率為99.64%，RSD=1.64％(n=6)，含量為29.75mg/g；未顯汞鹽的鑒別反應(yīng)。4.二十五味珊瑚丸中未檢出馬兜鈴酸A。5.測定出二十五味珊瑚丸中羥基紅花黃色素A含量范