1、目的：
　　探討小鼠鐵過(guò)載對(duì)骨髓造血微環(huán)境的影響及去鐵、抗氧化治療對(duì)其損傷的保護(hù)作用。
　　內(nèi)容：
　　通過(guò)建立小鼠鐵過(guò)載動(dòng)物模型，研究鐵過(guò)載對(duì)骨髓造血微環(huán)境的影響及可能機(jī)制，并探討地拉羅司去鐵及NAC抗氧化治療后，對(duì)該損傷作用的逆轉(zhuǎn)情況，為臨床治療繼發(fā)性鐵過(guò)載提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.通過(guò)4Gyγ射線全身照射和(或)右旋糖酐鐵腹腔注射建立正常和骨髓損傷情況下的鐵過(guò)載小鼠模型，通過(guò)①病理組織切片蘇

2、木精-伊紅染色與普魯士藍(lán)染色的方法分析鐵過(guò)載小鼠肝臟、脾臟、骨髓的形態(tài)及鐵沉積情況；②流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)內(nèi)可變鐵池(LIP)水平驗(yàn)證鐵過(guò)載模型的成功建立。
　　2.利用倍增時(shí)間及CCK8試劑盒檢測(cè)BM-MSCs的增殖能力；利用成骨及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)BM-MSCs向成骨及成脂細(xì)胞分化；采用油紅-o、堿性磷酸酶（ALP）、茜素紅染色檢測(cè)BM-MSCs成骨及成脂定向分化能力；利用共培養(yǎng)的方法檢測(cè)BM-MS

3、Cs的造血支持能力；利用骨髓病理免疫組化檢測(cè)骨髓微環(huán)境造血因子的表達(dá)。
　　3.采用2’,7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)探針?lè)z測(cè)鐵過(guò)載前后小鼠BM-MSCs活性氧(ROS)水平；利用Real-time RT-PCR方法檢測(cè)ROS相關(guān)基因 FOXO3、PI3K水平的表達(dá)；成骨相關(guān)基因 RUNX2、ALP、OCN，成脂相關(guān)基因 PPARg、Adipsin、aP2的表達(dá)；檢測(cè)骨髓造血微環(huán)境造血因子VEGF、CXCL12、S

4、CF的表達(dá)。
　　4.經(jīng)地拉羅司(DFX)去鐵或經(jīng)N-乙酰半胱氨酸（NAC）抗氧化治療后，檢測(cè)上述指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠肝臟、脾臟、骨髓內(nèi)可見(jiàn)大量鐵沉積，BM-MSCs內(nèi)LIP水平明顯升高，提示鐵過(guò)載模型成功建立；
　　2.鐵過(guò)載抑制BM-MSCs的增殖能力，鐵劑組倍增時(shí)間（1.74±0.36天）長(zhǎng)于對(duì)照組(1.03±0.17天)（p<0.05）。鐵過(guò)載影響B(tài)M-MSCs的成骨及成脂分化的平衡，鐵

5、過(guò)載組成骨細(xì)胞 ALP表達(dá)及茜素紅染色減弱，成脂細(xì)胞油紅-O染色增強(qiáng)。
　　3.鐵過(guò)載抑制BM-MSCs的造血支持能力，在與骨髓單個(gè)核細(xì)胞（BMMNCs）共培養(yǎng)1周后，其支持BMMNCs形成的造血細(xì)胞集落形成單位數(shù)(CFU-E，BFU-E，CFU-GM和CFU-mix)均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。
　　4.鐵過(guò)載抑制骨髓造血微環(huán)境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表達(dá)，免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示與對(duì)照組比較，

6、鐵劑組造血因子VEGF、CXCL12、SCF表達(dá)明顯減弱，經(jīng)去鐵或抗氧化處理后，上述改變部分恢復(fù)(P<0.05)。
　　5.加鐵組BM-MSCs內(nèi)ROS水平明顯高于對(duì)照組；且通過(guò)檢測(cè)ROS相關(guān)的信號(hào)通路發(fā)現(xiàn)，加鐵組 BM-MSCs的FOXO3表達(dá)減少、PI3K表達(dá)明顯升高(P<0.05)，當(dāng)給予DFX、NAC處理后，BM-MSC細(xì)胞內(nèi)ROS水平及其相關(guān)信號(hào)通路可被抑制(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.通過(guò)腹腔注射