1、背景： 腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibbrosis，RIF)幾乎是所有腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎衰竭(end-stage renal disease，ESRD)的共同途徑。肌纖維母細(xì)胞(myofiroblast，MyoF)的形成是間質(zhì)纖維化的關(guān)鍵步驟，它是間質(zhì)纖維化發(fā)生的重要效應(yīng)細(xì)胞。它的來(lái)源尚未完全清楚，但傾向于主要由腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(tubular epithelial-myofibroblast

2、 transdifferentiation,TMET)而來(lái)。α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)是肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白。已經(jīng)證實(shí)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor，CTGF)可以誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(TMET)。抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)分化可能是治療纖維化的途徑之一。本實(shí)驗(yàn)中，我們研究塞來(lái)昔布(celecoxib)對(duì)腎小管上皮轉(zhuǎn)分化的作用，為臨床防治腎間質(zhì)纖維化及終末期腎臟疾病提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3、 方法： 將體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)分為空白對(duì)照組、不同劑量塞來(lái)昔布對(duì)照組、不同劑量CTGF誘導(dǎo)組、及不同劑量塞來(lái)昔布抑制組。每組設(shè)三個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48小時(shí)。應(yīng)用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；通過(guò)間接免疫熒光方法觀察肌成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)志物α-SMA的表達(dá)；以流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)和平均熒光強(qiáng)度；以ELISA法測(cè)定上清液中PGE2的含量；應(yīng)用Western blot法檢測(cè)α-SMA的表達(dá)。 結(jié)果

4、： ①塞來(lái)昔布對(duì)照組的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、α-SMA的表達(dá)及上清液中PGE2的含量等與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P＞0.05)；②CTGF誘導(dǎo)組腎小管上皮細(xì)胞從原有典型的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為長(zhǎng)梭形肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞；免疫熒光可見大量細(xì)胞表達(dá)α-SMA；α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及α-SMA表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度(MCF)均明顯增加(P＜0.05)；上清液中PGE2的含量增加(P＜0.05)；α-SMA蛋白的表達(dá)較其他各組明顯增加(P＜0.05)；③塞來(lái)

5、昔布明顯抑制了CTGF誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及α-SMA表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度(MCF)均明顯下降(P＜0.05)，呈劑量依賴；抑制α-SMA的表達(dá)(P＜0.05)；并不同程度地抑制CTGF的促PGE2增多作用(P＜0.05)。 結(jié)論： CTGF可誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，并促進(jìn)PGE2的合成，塞來(lái)昔布能抑制CTGF誘導(dǎo)的TEMT的作用，減少PGE2的合成，對(duì)腎間質(zhì)纖維化有負(fù)性調(diào)節(jié)作用，其作用途徑可能