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![激光顯微捕獲切割技術在脫落細胞類檢材中的方法學建立及其法醫(yī)學應用研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/11/11/64f966a4-6302-488e-9daf-331bed6efbe0/64f966a4-6302-488e-9daf-331bed6efbe01.gif)
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文檔簡介
1、目的:
本課題旨在建立一套適于脫落細胞檢測的激光顯微捕獲切割技術(LaserCaptureMicrodissection,LCM)的方法,并對該方法在脫落細胞類檢材特別是降解的脫落細胞樣本檢驗中的應用進行探索性研究。
方法:
1、以口腔上皮脫落細胞為模型,從染色方法、提取方法、循環(huán)參數等方面進行比較研究,建立LCM方法。
2、以酸性飲料和口腔上皮細胞混合物為研究對象,對Chelex
2、-100法、Chelex-100與Microcon100相結合法、DNAIQTM提取法等不同方法分別與LCM方法進行比較研究。
3、以尿液中脫落細胞為研究對象,對目前法庭科學常用檢測方法與LCM方法進行比較研究。
結果:
1、利用本實驗所建立的LCM方法捕獲10個口腔上皮細胞,即可獲得完整的DNA分型,重復性較好,為法醫(yī)實際案件中微量生物檢材的DNA檢驗提供了一種參考方法。
2、酸
3、性飲料和口腔上皮細胞混合物僅采用Chelex-100法或與Microcon100相結合,難以獲得較高質量的DNA,從而難以獲得較滿意的檢測結果;對于檸檬酸類混合物,可直接采用DNAIQTM提取法提取,并可以通過減小洗脫體積,提高DNA濃度,從而提高DNA的檢出率;乳酸類富含蛋白質的混合物,可考慮采用LCM法,將靶細胞從復雜環(huán)境中分離,更利于獲得較好的檢測結果。
3、新鮮尿液組:采用LCM技術提取的DNA在所有基因座上均獲得
4、較滿意的結果,而采用Chelex-100提取法提取的DNA在各基因座上存在等位基因丟失、非特異性擴增、峰值低等問題;儲存尿液組:4℃儲存10天以內和室溫儲存4天以內的尿液采用LCM技術聯合DNAIQTM提取法的均可明確判讀12個以上基因座;而采用Chelex-100提取法未獲得有效分型。
結論:
LCM法為脫落細胞類檢材,特別是降解的脫落細胞的DNA檢測提供了一種有效的方法,同時也為其他種類的微量生物檢材的檢
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