1、禽白血病(Avian leukosis，AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus，ALV)和禽肉瘤病病毒(Avian sarcoma virus，RSV)所引起的禽類腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。病毒所致腫瘤類型較多，大多為傳染性的良性及惡性腫瘤。其中，J亞群禽白血病(Subgroup J avian leukosis)是由反轉(zhuǎn)錄病毒科的J亞群禽白血病病毒(Avian leukosis virus of subgroup J

2、，ALV-J)所引起的一種以侵害肉雞為主的腫瘤性疾病。
　　 本實(shí)驗(yàn)對臨床疑似感染雞進(jìn)行臨床檢查，剖檢發(fā)現(xiàn)肝臟腫大表面有白色結(jié)節(jié)，被膜下有血塊，腎臟腫大明顯，表面有腫瘤結(jié)節(jié)。病理組織學(xué)檢查肝臟有彌漫性髓細(xì)胞樣瘤細(xì)胞浸潤，腎臟分布局灶性髓細(xì)胞樣瘤細(xì)胞。間接免疫熒光鑒定病毒感染DF-1細(xì)胞出現(xiàn)陽性特異性熒光，ALV-J gp85基因PCR鑒定正確，表明成功分離鑒定1株ALV-J。根據(jù)NCBI發(fā)表的禽白血病基因序列，針對gp85基因設(shè)

3、計(jì)引物，從疑似感染雞病料中提取前病毒DNA，PCR擴(kuò)增出924 bp的目的條帶，利用原核表達(dá)載體pET-30a(+)構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-gp85，經(jīng)酶切和測序鑒定正確后轉(zhuǎn)化入E.coli Rosetta感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE分析，表達(dá)的蛋白以包涵體形式存在，重組蛋白大小為40 kDa。經(jīng)Western blot檢測分析，結(jié)果表明該pET-gp85蛋白具有良好的反應(yīng)原性。
　　 將pET-gp85蛋白

4、經(jīng)鎳柱純化復(fù)性后作為包被抗原，建立檢測ALV-J-gp85抗體的間接ELISA方法，并對間接ELISA方法工作條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，封閉液濃度為1％ BSA;抗原包被量為1μg/mL;血清稀釋度為1∶400;血清作用時(shí)間為1 h;二抗稀釋度為1∶4000;二抗作用時(shí)間為1 h;底物顯色時(shí)間為10 min。經(jīng)重復(fù)性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)和臨界值確定結(jié)果顯示，建立的檢測方法有良好的重復(fù)性，與馬立克病毒、傳染性支氣管炎病毒、大腸桿菌、沙門氏菌等陽