1、近年來(lái)，固定化金屬離子親和層析(IMAC)技術(shù)因其分離快速、分離條件溫和，成本低等優(yōu)勢(shì)而得到廣泛應(yīng)用。但是在一些復(fù)雜的混合體系中，由于蛋白質(zhì)大分子會(huì)與目標(biāo)小分子競(jìng)爭(zhēng)親和位點(diǎn)，降低了親和介質(zhì)對(duì)活性小分子的分離純化效果而使其應(yīng)用范圍受到了限制。為了減弱實(shí)際體系中大分子蛋白質(zhì)的干擾，近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的限進(jìn)性介質(zhì)具有一定的優(yōu)勢(shì)，其主要的特點(diǎn)是在吸附介質(zhì)表面修飾一層半滲透屏障形成體積排阻效應(yīng)，并結(jié)合IMAC的親和力選擇性富集目標(biāo)活性分子。因此，根據(jù)

2、上述思路，研究制備了一種具有高載量、高選擇性限進(jìn)性親和吸附介質(zhì)。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)采用乳化交聯(lián)法制備磁性殼聚糖微球(M-CS)作為親和介質(zhì)的載體，微球平均粒徑為25μm。使用環(huán)氧氯丙烷對(duì)載體進(jìn)行活化，當(dāng)溶脹時(shí)間為4h、活化溫度為50℃、活化時(shí)間為6h、環(huán)氧氯丙烷體積分?jǐn)?shù)50％、NaOH濃度為0.4M時(shí)，環(huán)氧基密度為260μmol·g-1。通過(guò)亞氨基乙二酸(IDA)作為間隔臂螯合親和銅離子(Cu2+)，制備M-CS@C

3、u2+。選擇牛血清蛋白(BSA)為大分子蛋白模型，考察了離子強(qiáng)度、pH值、吸附時(shí)間、配基密度(Cu2+)對(duì)吸附效果的影響，當(dāng)緩沖液離子濃度為0.02M、pH=7、吸附時(shí)間為60min，配基密度為140μmol·g-1時(shí)，對(duì)BSA(1mg·mL-1)的吸附量達(dá)到117.6mg·g-1。
　　(2)用聚乙二醇mPEG1900對(duì)親和介質(zhì)進(jìn)行表面修飾，當(dāng)以三氟化硼為催化劑，催化劑用量（摩爾比）1∶0.08、反應(yīng)時(shí)間6h，反應(yīng)溫度50℃時(shí)，

4、mPEG1900接枝率達(dá)26.46％，并通過(guò)紅外光譜(FT-IR)、掃描電子顯微鏡（SEM）、差式量熱分析儀(DSC)及熱失重(TG)對(duì)其進(jìn)行了表征。研究了接枝率對(duì)阻擋BSA吸附效果的影響，限進(jìn)親和介質(zhì)對(duì)BSA的吸附量隨著mPEG1900的接枝率升高而降低。當(dāng)介質(zhì)配基密度為140μmol·g-1，表面mPEG1900接枝率為26.46％時(shí)，介質(zhì)對(duì)BSA的阻拒率達(dá)到50.68％。
　　(3)為了進(jìn)一步探索限進(jìn)親和介質(zhì)的應(yīng)用效果，以V

5、al-Ser-Leu-Pro-Glu-Try(VW-6)為小分子肽模型，BSA為大分子蛋白模型分子，建立了模擬混合體系以及酪蛋白酶解體系，比較了mPEG1900修飾前后親和介質(zhì)在混合體系以及酪蛋白酶解體系中對(duì)小分子的吸附選擇性以及對(duì)大分子的阻拒效果。結(jié)果表明限進(jìn)親和介質(zhì)對(duì)VW-6的吸附效果有提高，對(duì)大分子BSA的吸附具有一定的阻擋效果。說(shuō)明限進(jìn)性金屬離子親和介質(zhì)能夠有效的富集小分子多肽，減少大分子蛋白的非特異性吸附，為提高活性小分子的分