氨基酸的酶法制備及近紅外光譜技術在其中的應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、氨基酸是蛋白質的主要組成部分具有廣泛的生物活性,在生物體代謝過程中起到重要作用,同時作為重要的化學試劑及醫(yī)藥中間體,在多肽合成以及手性藥物開發(fā)等領域具有廣泛的應用。傳統(tǒng)的氨基酸的制備方法主要采用發(fā)酵生產和化學合成,本論文嘗試了S-腺苷蛋氨酸(SAM)、L-鳥氨酸以及D-精氨酸的酶法制備工藝,并利用近紅外光譜技術作為分析監(jiān)測手段,考察了酶法轉化過程中的底物或產物的變化過程,為小品種氨基酸的清潔生產以及在線控制奠定了基礎。
   本

2、論文首先對以L-蛋氨酸和三磷酸腺苷(ATP)為底物利用腺苷蛋氨酸合成酶,酶法制備SAM的酶法合成條件進行優(yōu)化,得到了酶法合成的最優(yōu)條件:SAM合成酶400 U/L, L-蛋氨酸20 mmol/L、ATP10mmol/L,K2SO410 mmol/L,MgSO4120 mmol/L,0.5%β-巰基乙醇5 ml/L,37℃,pH8.5。在此條件下ATP的轉化率達到75%以上。同時采用近紅外檢測技術在8965.2~5413.2 cm-1波段

3、范圍內采用偏最小二乘法建立數(shù)學模型,選擇多元散射校正預處理光譜圖建立近紅外光譜技術模型y=0.9597x+2.1776,R2=0.9611,并對酶促反應進行了測定分析,結果表明此模型可以滿足定量分析的要求。
   其次,利用響應面優(yōu)化設計對以L-精氨酸為底物利用精氨酸酶,酶法制備L-鳥氨酸的工藝進行了優(yōu)化,建立二次響應面回歸模型,回歸方程的F值和模型的相關系數(shù)R2均較理想,表現(xiàn)出較好的擬合度。從而確定最佳反應條件為:L-精氨酸1

4、50 g/L,精氨酸酶0.5 g/L(酶活為6314.64 U/g),反應溫度為37℃,pH自然。在該條件下L-鳥氨酸的轉化率為95.86%,與模型預測有較好吻合。在此基礎上利用近紅外光譜技術建立了L-鳥氨酸酶法轉化過程的含量檢測方法,結果表明:模型預測效果較好(檢驗集y=0.9484x+4.062,R2=0.9484,校正集y=0.9412x+4.0169,R2=0.9709),可用于L-鳥氨酸酶法制備實時監(jiān)測,為L-鳥氨酸及其他氨基

5、酸酶法生產過程中的實施檢測提供了新的研究思路。
   此外,利用精氨酸酶專一催化L-精氨酸水解的原理以DL-精氨酸為底物,同時制備D-精氨酸與L-鳥氨酸鹽酸鹽,并得到高附加價值的產物。經反應條件優(yōu)化確定的DL-精氨酸的最佳酶促反應條件為:底物質量濃度為40g/L,精氨酸酶質量濃度為0.2g/L,pH自然,37℃下反應24 h,此條件下L-精氨酸的轉化率為99.5%。分離純化后D-精氨酸的含量99.0%,L-鳥氨酸含量達到98.9

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