1、姜黃素已被證實(shí)具有廣泛的藥理活性,如抗炎、抗氧化、抗腫瘤,抑制血栓、防止心肌梗死等。臨床研究發(fā)現(xiàn),以高劑量(12g/天)口服姜黃素,無毒副作用。然而姜黃素的生物利用度極低,限制了其在臨床上的應(yīng)用。為了解決這個(gè)問題,本課題結(jié)合樹枝狀大分子的特性和前藥的概念,開發(fā)出一種具有主動(dòng)靶向性的前藥型樹枝狀大分子載體,期望提高姜黃素的生物利用度。
　　本文通過發(fā)散法合成了低代數(shù)聚酰胺-胺(PAMAM),利用三羥甲基氨基甲烷(Tris)使其末端羥

2、基化,再通過酯鍵將藥物分子姜黃素(Cur)和靶向分子葉酸(FA)鍵合到樹枝狀大分子PAMAM-Tris表層,制備了葉酸接枝的姜黃素前藥樹枝狀大分子載體FA-PEG-PAMAM-Tris-Cur。此外還合成了未鍵合葉酸分子的前藥載體PAMAM-Tris-Cur以及末端氨基化的一系列載體PAMAM-Cur和FA-PEG-PAMAM-Cur,與目標(biāo)載體FA-PEG-PAMAM-Tris-Cur進(jìn)行對照研究。
　　本文通過核磁峰面積積分法

3、計(jì)算得出每個(gè)PAMAM分子表層平均鍵合了3.0個(gè)姜黃素分子和2.8個(gè)葉酸分子;每個(gè)PAMAM-Tris分子表面平均鍵合了9.0個(gè)姜黃素分子和6.0個(gè)葉酸分子。采用Zeta納米粒度分析儀和透射電鏡(TEM)考察載體分子的粒徑和形貌,結(jié)果顯示目標(biāo)產(chǎn)物FA-PEG-PAMAM-Tris-Cur粒徑小于50nm;載體分子無聚集現(xiàn)象,呈球狀均勻分布,具有良好的單分散性和穩(wěn)定性。通過體外溶血試驗(yàn)對載體的生物相容性進(jìn)行初步考察,結(jié)果顯示載體未引起紅細(xì)

4、胞凝聚和溶血現(xiàn)象,并且接枝聚乙二醇和末端羥基化可以降低溶血率。
　　載藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FA-PEG-PAMAM-Tris-Cur的載藥量(23.1±1.5％,w/w)較FA-PEG-PAMAM-Cur(11.8±1.2%,w/w)提高了一倍,FA-PEG-PAMAM-Tris-Cur/Cur的載藥量較FA-PEG-PAMAM-Cur/Cur也提高了10%左右,達(dá)到了實(shí)驗(yàn)預(yù)期目的。而釋藥實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與預(yù)期的分兩步釋放不相符,可能是因?yàn)獒?/p>

5、放介質(zhì)中未加酯酶以及在此釋放條件下姜黃素會大量降解,后續(xù)研究中會進(jìn)一步優(yōu)化釋放條件。
　　選用人肝癌HepG2細(xì)胞系研究其藥物攝取情況,結(jié)果顯示經(jīng)過葉酸修飾的前藥載體比未修飾的載體,熒光強(qiáng)度大大增加,證明了葉酸的腫瘤主動(dòng)靶向性。并且通過激光共聚焦顯微鏡研究藥物進(jìn)入細(xì)胞后的分布情況,結(jié)果顯示姜黃素進(jìn)入細(xì)胞后主要分布在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜上,細(xì)胞核內(nèi)的分布較少。
　　綜上所述,經(jīng)過葉酸修飾的前藥型樹枝狀大分子衍生物FA-PEG-PAM