1、硫酸軟骨素(chondroitin sulfate)簡(jiǎn)稱CS，在體內(nèi)以蛋白多糖的形式存在于軟骨等組織基質(zhì)中，與蛋白多糖中的核心蛋白以共價(jià)鍵相結(jié)合。硫酸軟骨素是一種酸性糖胺聚糖，由重復(fù)二糖單位的葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖以β-1，4糖苷鍵連接而成。一般含有20～60個(gè)重復(fù)二糖，相對(duì)分子量為5000～50000Dal。硫酸軟骨素具有治療高血脂，心絞痛，改善血液供應(yīng)、降低血清膽固醇、預(yù)防和治療關(guān)節(jié)畸形等多種藥理作用，因此廣泛應(yīng)用于臨

2、床、醫(yī)藥、和保健食品等領(lǐng)域。
　　 本課題以清真屠宰場(chǎng)的新鮮牛喉骨軟骨為原料，以硫酸軟骨素的純度為主要考察指標(biāo)，采用堿-單酶酶解法、堿-雙酶酶解法分離硫酸軟骨素與膠原蛋白。
　　 1.在堿-菠蘿蛋白酶酶解法中，首先以硫酸軟骨素的得率為主要的考察指標(biāo)，優(yōu)化了堿提取法的生產(chǎn)工藝及參數(shù)。優(yōu)化工藝條件:提取溫度40℃，料液比為1∶7，提取時(shí)間2h，堿液濃度6％，然后優(yōu)化了菠蘿蛋白酶酶解工藝，優(yōu)化工藝條件:酶用量0.08％、pH值

3、6.0、酶解溫度40℃、酶解時(shí)間2h，產(chǎn)品的得率為18.56％，氨基己糖含量為28.13％，產(chǎn)品純度為79.32％。
　　 2.在堿-胰蛋白酶酶解法中，以硫酸軟骨素的純度為主要的考察指標(biāo)，在堿提取的基礎(chǔ)上選擇胰蛋白酶（動(dòng)物蛋白酶）進(jìn)一步分離CS與膠原蛋白。優(yōu)化工藝條件:pH值9.0，酶用量0.09％，酶解溫度48℃、酶解時(shí)間2.5h，產(chǎn)品的得率為35.40％，氨基己糖含量為34.26％，產(chǎn)品純度為96.64％。
　　 3

4、.在堿-堿性蛋白酶酶解中，以硫酸軟骨素的純度為主要的考察指標(biāo)，在堿提的基礎(chǔ)上選擇堿性蛋白酶進(jìn)一步分離CS與膠原蛋白。優(yōu)化工藝條件:酶解時(shí)間2.0h、pH9.0、酶用量0.09％、酶解溫度52℃，CS產(chǎn)品的得率為35.56％，氨基己糖含量為34.88％，純度為98.36％。
　　 4.在堿-雙酶法酶解中，以硫酸軟骨素的純度為主要的考察指標(biāo)，在堿提的基礎(chǔ)上，根據(jù)堿-單酶法試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行雙酶復(fù)合提取硫酸軟骨素，其中堿性蛋白酶與胰蛋白酶

5、復(fù)合提取中復(fù)合酶配比為1∶0.6時(shí)，pH9.0，酶解溫度52℃，酶解時(shí)間2h，CS產(chǎn)品得率為30.28％，氨基己糖含量為33.74％，純度為95.15％。
　　 5.對(duì)硫酸軟骨素分離提取工藝優(yōu)化條件進(jìn)行小試研究，主要是對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證及對(duì)比研究。根據(jù)國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)產(chǎn)品的各項(xiàng)指標(biāo)，如理化性質(zhì)檢測(cè)和微生物檢測(cè)，其中堿-雙酶酶解法所分離提取CS產(chǎn)品純度最高，為94.32％，超出國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)(68％)及出口標(biāo)準(zhǔn)(84.6％)，而且C

6、S產(chǎn)品的其他指標(biāo)也均符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)要求。
　　 6.采用超濾濃縮的方法，分離純化堿-單酶法及堿-雙酶法提取的硫酸軟骨素與膠原蛋白，然后測(cè)定用不同蛋白酶酶解法分離得到的膠原蛋白的分子量范圍及膠原蛋白含量。堿-菠蘿蛋白酶酶解法分離得到的蛋白含量為10.56g/L，堿-胰蛋白酶酶解法分離得到的蛋白含量為10.05g/L，堿-堿性蛋白酶酶解法分離得到的蛋白含量為9.02g/L，堿-雙酶酶解法分離得到的蛋白含量為9.90 g/L，經(jīng)Tr