1、必特螺旋霉素(Bitespiramycin，BT)是將耐熱鏈霉菌（Streptomycesthermotolerans）的4"-O-異戊?；D移酶基因(4"-O-isovaleryltransferase gene，ist)整合至螺旋霉素產生菌S.spiramyceticus F21基因組所獲得的基因工程菌產生的，主成分為4"-O-異戊酰螺旋霉素(4"-O-isovalerylspiramycin，ISP)。ist基因表達水平的提高可提

2、高必特螺旋霉素中ISP的比例，從而簡化其生產工藝，降低生產成本。本文對ist的特異性調控基因進行研究，為提高ist基因的表達水平提供了重要依據。
　　有研究推測acyB2基因可能是ist的正調控基因，但未從基因功能上予以證實。本研究將耐熱鏈霉菌中的acyB2基因失活后，突變菌株無法合成碳霉素，acyB2的回復可以使碳霉素重新產生，利用鏈霉菌強啟動子ermE*p過表達acyB2基因能夠大幅度提高碳霉素的產量。結果證實acyB2是碳霉

3、素生物合成的正調控基因。本研究還在耐熱鏈霉菌中克隆到一個與acyB2基因連鎖的新調控基因cbmR。阻斷cbmR基因也導致菌株無法合成碳霉素，回復cbmR基因可以恢復碳霉素的產生。但是利用強啟動子ermE*p過表達cbmR，碳霉素的合成反而受到了抑制。通過qPCR在野生菌株、acyB2阻斷菌株和cbmR阻斷菌株中檢測了碳霉素生物合成基因的轉錄水平，結果顯示AcyB2和CbmR可激活碳霉素生物合成基因簇中多數基因的轉錄，包括ist基因。在a

4、cyB2過表達菌株中，被調控的靶基因也過表達，而cbmR過表達菌株中靶基因的表達反而被抑制，這與碳霉素合成的結果一致。為了研究cbmR和acyB2的調控機制，通過優(yōu)化表達條件，獲得CbmR和AcyB2蛋白在E.coli BL21(DE3)/pKJE7中的可溶性表達。
　　螺旋霉素生物合成基因簇中含有與acyB2和cbmR同源的兩個調控基因srm40和srm22，srm40是螺旋霉素生物合成的途徑特異性正調控基因，srm22又正調控

5、srm40的表達。在麥迪霉素生物合成基因簇中也有同源的兩個正調節(jié)基因orf27和orf28，orf28正調控orf27。碳霉素、螺旋霉素和麥迪霉素屬于結構相似的16元大環(huán)內脂，生物合成基因在進化上也存在相似性，同源的正調控基因功能很可能相似，能進行交叉調控。本研究將三組同源調控基因cbmR/acyB2、srm22/srm40和orf28/orf27分別與ist基因一起轉化到變鉛青鏈霉菌TK24中，共構建了包括陽性對照和陰性對照在內的9種

6、轉化子，對螺旋霉素進行生物轉化。通過檢測發(fā)酵產物中ISP的產量，發(fā)現雙調控基因cbmR-acyB2、srm22-srm40對ISP轉化率比單調控基因acyB2、srm40的轉化率低，而orf28-orf27卻明顯好于單個調控基因orf27。其中acyB2和orf28-orf27對提高ist基因的表達的效果最好，甚至超過強啟動子ermE*p。而在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入4 mM不同的L-氨基酸可明顯提高各轉化子的ISP產量，L-Leu的效果最佳。