1、目的:外傷、骨感染、骨腫瘤等疾病造成的缺損，需要進行骨的修復重建。臨床上，通過骨移植的手段可以為機體提供機械力學支撐并促進骨的再生。利用靜電紡絲計技術，制備多孔、仿生骨組織工程支架;通過透射電鏡及掃描電鏡手段檢測所制備支架的結構特征;利用酶消化法提取SD大鼠腹股溝脂肪組織中的脂肪源性干細胞，并將干細胞與所制備的支架材料進行復合培養(yǎng)，以研究所制備的支架材料的生物相容性;以期通過此研究獲得生物相容性好、具有多孔特征、適合ADSCs生長、粘附

2、和增殖的骨組織工程支架，并指導其后續(xù)基礎及臨床研究。
　　方法:1、利用全自動冷凍研磨儀制備天然骨粉;明膠和聚己內酯按10％的比重分別溶入三氟乙醇中，獲得均勻的明膠和聚己內酯溶液，按1∶1的比例進行混合，得到了混合溶液A;在溶液A的基礎上，我們加入10％的納米羥基磷灰石，得到溶液B;另外，在混合溶液A的基礎上，加入10％的骨粉，我們得到了溶液C。通過靜電紡絲技術，將三種溶液制備成納米纖維膜支架，消毒后備用。
　　2、支架材料

3、的表征檢測:分別取適量的骨粉和納米羥基磷灰石行掃描電鏡檢測。將三種靜電紡絲所制備的支架材料分別切取小片，行掃描電鏡檢測。在靜電紡絲過程中用銅網(wǎng)膜收集三組材料的電紡纖維，作為透射電鏡檢測標本，行透射電鏡檢測。
　　3、脂肪源性干細胞的分離及培養(yǎng):利用酶消化法分離SD大鼠腹股溝脂肪組織內的脂肪源性干細胞，進行傳代培養(yǎng)，選用第3代細胞進行后續(xù)實驗研究。
　　5、掃面電鏡檢測:細胞與材料共培養(yǎng)2天后，從每個實驗組的培養(yǎng)基中分別取出材

4、料。用梯度乙醇脫水，將樣品放入凍干機中進行凍干，最后將得到的樣品送掃描電鏡檢測。
　　6、細胞增殖實驗:將直徑大小為6mm的三種材料分別放入96孔板中，隨后將細胞接種在96孔板的材料上進行培養(yǎng)。應用CCK-8試劑盒檢測細胞在不同時間點(12h，24h，48h，72h)的增殖情況，于酶標儀490 nm波長測定各孔吸光度OD值。
　　7、細胞活力檢測:首先高溫高壓消毒瓊脂糖溶液，在凝固之前，向使用的24孔板中分別加入瓊脂糖，鋪滿

5、培養(yǎng)板底部，以防止脂肪源性干細胞在培養(yǎng)板底面粘附。隨后將直徑大小為8mm的三種支架材料分別放入24孔板中。將脂肪源性干細胞接種在各組材料上，培養(yǎng)48小時后，取各組材料按活死染色試劑盒說明，對材料上的脂肪源性干細胞進行染色。在倒置熒光顯微鏡下觀察，并隨機拍攝照片。最后我們應用Image-Pro Plus6.0軟件對材料上的活細胞進行計數(shù)。
　　8、統(tǒng)計分析:每項實驗分別進行了至少三次重復實驗，獲得的數(shù)據(jù)分別用均數(shù)±標準差表示。所獲得

6、的數(shù)據(jù)分別用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計分析。用方差分析方法來檢測各組數(shù)據(jù)間的統(tǒng)計學差異。P＜0.05被認定為有統(tǒng)計學意義。
　　結果:1、我們實驗中的骨粉達到了微米和納米大小級別，形狀不規(guī)則。從SIGMA公司購買的納米羥基磷灰石顆粒直徑小于200nm，形狀為圓球形。通過靜電紡絲技術，我們成功地制備了三種支架材料，即明膠/聚己內酯纖維膜，明膠/聚己內酯/納米羥基磷灰石纖維膜，以及明膠/聚己內酯/骨粉纖維膜。并且納米羥基磷灰石和骨粉

7、分別被成功地結合到了明膠/聚己內酯/納米羥基磷灰石纖維膜和明膠/聚己內酯/骨粉纖維膜的纖維內部。
　　2、當納米羥基磷灰石和骨粉被結合到明膠/聚己內酯纖維內之后，纖維的直徑變得更細，并且三組材料中，明膠/聚己內酯/納米羥基磷灰石纖維膜組纖維最細。三組支架材料內部的纖維直徑大小皆成正態(tài)分布。三組支架材料內部纖維直徑大小存在顯著差別(P＜0.001)。明膠/聚己內酯纖維膜組纖維直徑最大，明膠/聚己內酯/納米羥基磷灰石纖維膜組纖維直徑最

8、小，明膠/聚己內酯/骨粉纖維膜組纖維直徑大小居中。
　　3、通過酶消化法能夠成功地分離出了SD大鼠腹股溝脂肪組織中脂肪源性干細胞。脂肪源性干細胞生長狀態(tài)良好。
　　4、脂肪源性干細胞皆均覆蓋在多孔復合支架材料的表面，并通過偽足向材料的內部延伸。明膠/聚己內酯/納米羥基磷灰石纖維膜和明膠/聚己內酯/骨粉纖維膜上的細胞較多，并且細胞之間相互靠近。
　　5、在ADSCs與纖維膜共培養(yǎng)的前24小時，明膠/聚己內酯纖維膜、明膠/

9、聚己內酯/納米羥基磷灰石纖維膜和明膠/聚己內酯/骨粉纖維膜三組材料上脂肪源性干細胞的增殖情況無明顯差異，三組OD值皆低于對照組。但是在24小時后，細胞皆增殖到較高水平，而且，明膠/聚己內酯/骨粉纖維膜組細胞增殖速度超過了對照組。在48小時后，明膠/聚己內酯/骨粉纖維膜組OD值高于對照組。
　　6、脂肪源性干細胞在三組材料上分布均勻，而且材料上的細胞主要被染成綠色，紅色細胞較少。各組之間的活細胞數(shù)量存在明顯差異，并且差異具有統(tǒng)計學意

10、義(P＜0.05)，明膠/聚己內酯纖維膜上活細胞最少，明膠/聚己內酯/骨粉纖維膜上活細胞最多，而明膠/聚己內酯/納米羥基磷灰石纖維膜上的活細胞數(shù)量居中。
　　結論:1、通過靜電紡絲技術，天然骨粉能夠通過靜電紡絲技術成功地結合到明膠/聚己內酯纖維內。
　　2、攜帶骨粉的gelatin/PCL纖維膜具有良好的生物相容性，是一種較為理想的組織工程支架。
　　3、攜帶骨粉的gelatin/PCL電紡纖維膜的制備及其生物相容性研