1、背景：
　　骨破壞是類風濕關節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA)的一大重要特點，且骨破壞程度與疾病嚴重程度及疾病導致的功能喪失密切相關。導致RA骨破壞的主要原因是滑膜炎，同時還有炎性因子和RANKL的分泌增加以及抗瓜氨酸組蛋白抗體的產生增加。既往研究發(fā)現(xiàn)，炎性細胞因子、自身抗體和RANKL均可刺激具有骨吸收功能的破骨細胞的分化，同時，體內有多條信號通路（如 JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB通

2、路等）通過不同的作用機制影響破骨細胞的增殖分化。近年來多項研究表明，維生素D缺乏普遍存在于RA患者，且增加維生素D攝入，可以延緩和控制 RA的發(fā)生發(fā)展。而維生素 D的經典作用是維持體內鈣、磷平衡的調節(jié)，近年來的研究發(fā)現(xiàn)其還在調節(jié)機體免疫功能中發(fā)揮重要作用，故把它劃分為一種新型的免疫抑制劑。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，（1）IL-22在RA疾病過程中有促進炎癥和促進破骨細胞形成的作用；（2）1,25(OH)2D3可降低RA患者血清中IL-22水平

3、，且呈劑量依賴性抑制RANKL表達；（3）1,25(OH)2D3能夠經過阻斷 IL-22下游的 JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB通路來抑制RANKL的分泌。本研究將進一步通過比較各給藥組破骨細胞分化的情況，來直觀的觀察1,25(OH)2D3能否通過阻斷這一信號通路，來抑制破骨細胞的生成。
　　目的：
　　1.研究1,25(OH)2D3是否能夠抑制破骨細胞的增殖分化；
　　2.研究1,25(OH)2

4、D3是否能通過阻斷 IL-22下游的 JAK-2/STAT-3和p38MAPK/NF-κB通路來抑制RA破骨細胞的生成。
　　方法：
　　1.從健康志愿者外周血中分離 PBMCs，用 RANKL（30ng/mL）、M-CSF（25ng/mL）誘導PBMC分化成破骨細胞，用1,25(OH)2D3（1nM）干預：分為以下3組：A組 PBMC+M-CSF；B組 PBMC+M-CSF+RANKL；C組PBMC+M-CSF+RANKL

5、+1,25(OH)2D3。于培養(yǎng)的第14d終止培養(yǎng)，固定玻片上細胞并對細胞進行TRAP染色，鏡下觀察破骨細胞形成情況；用RT-PCR檢測所加藥物對破骨細胞表面的標志物TRAP、組織蛋白酶K、基質金屬蛋白酶（MMP）-9 mRNA的表達的影響。
　　2.從RA患者的滑膜組織中分離培養(yǎng)FLS至4~8代；從健康志愿者外周血分離出PBMCs,均加入M-CSF（25ng/mL）預處理；3d后，將兩者共培養(yǎng)，同時按分組加入RANKL（30ng

6、/mL）、M-CSF（25ng/mL）、IL-22（10ng/mL）、1,25(OH)2D3（1nM）、信號轉導蛋白抑制劑等藥物，分為以下五組：a組：PBMC+RA-FLS+M-CSF；b組：PBMC+RA-FLS+M-CSF+RANKL；c組：PBMC+RA-FLS+M-CSF+IL-22+1,25(OH)2D3；d組：PBMC+ RA-FLS+M-CSF+1,25(OH)2D3+IL-22+AG490（JAK-2抑制劑）；f組：PB

7、MC+RA-FLS+M-CSF+1,25(OH)2D3+IL-22+SB203580（p38-MAPK抑制劑）。于共培養(yǎng)的第14d終止培養(yǎng)，固定玻片上細胞并行TRAP染色，觀察破骨細胞生成的情況；用RT-PCR檢測所加藥物對破骨細胞表面的標志物TRAP、組織蛋白酶K、基質金屬蛋白酶（MMP）-9 mRNA的表達的影響。
　　3.數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0軟件。
　　結果：
　　1.實驗一中A、B、C三組破骨細胞（TR

8、AP染色陽性的多核細胞）數(shù)量分別為7±0.816（個）、30±2.944（個）、5±2.16（個），B組較A組細胞數(shù)量明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；C組較B組細胞數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2.B組破骨細胞標志物TRAP、組織蛋白酶K、基質金屬蛋白酶（MMP）-9 mRNA的表達較A、C兩組高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3.實驗二中a組、b組、c組、d組、f組的破骨細胞數(shù)

9、量依次是7.5±1.732（個）、38.5±3.416（個）、0.5±0.477（個）、21.75±3.775（個）、9±2.944（個）；b組較a組細胞數(shù)量明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；c,d,f三個組細胞數(shù)量較b組明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；d組和f組的細胞數(shù)量較c組明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4.a組、c組、d組及f組中TRAP、組織蛋白酶K、基質金屬蛋白酶（MMP）-9