1、目的：
　　本文建立低分子肝素（LMWH）的天青 A-紫外分光光度法，考察 LMWH在人工胃、腸液中的穩(wěn)定性；制備 LMWH pH敏感巰基殼聚糖/O-羧甲基殼聚糖(TCS/O-CMC)混合聚合物納米粒，并對(duì)其凍干品進(jìn)行了研究；考察和研究pH敏感TCS/O-CMC混合聚合物納米粒的體外釋放特性及其在SD大鼠體內(nèi)的相對(duì)生物利用度。
　　方法：
　?。?）LMWH體外分析方法的建立及其在人工胃、腸液中的穩(wěn)定性考察
　　

2、采用天青A-紫外分光光度法測(cè)定體外LMWH的含量，并進(jìn)行精密度、回收率等方法學(xué)考察；采用上述建立的分析方法，測(cè)定LMWH隨時(shí)間延長(zhǎng)，在人工胃、腸液中的含量，考察LMWH的穩(wěn)定性。
　　（2）LMWH pH敏感TCS/O-CMC混合聚合物納米粒的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)
　　以LMWH為模型藥物，TCS和O-CMC的混合物為載體材料，羥丙甲基纖維素鄰苯二甲酸酯（HP-55）為離子交聯(lián)劑，采用離子交聯(lián)法制備 pH敏感 TCS/O-CMC混

3、合聚合物納米粒；通過單因素和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)對(duì)納米粒的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化；用馬爾文粒度儀測(cè)定納米粒粒徑、PDI及電位；計(jì)算納米粒的載藥量及包封率；用透射電鏡檢測(cè)納米粒形態(tài)。
　　（3）LMWH pH敏感TCS/O-CMC混合聚合物納米粒的凍干品制備及性質(zhì)考察
　　分別以葡萄糖、甘露醇及兩者混合物作為凍干保護(hù)劑，采用冷凍干燥法制備納米粒凍干品，考察凍干保護(hù)劑的種類和濃度對(duì)納米粒的外觀、粒徑、PDI及電位的影響；透射電鏡檢測(cè)凍干復(fù)溶后

4、納米粒的形態(tài)。
　?。?）LMWH pH敏感TCS/O-CMC混合聚合物納米粒的體外釋放度考察
　　分別在pH1.0、pH6.8及模擬胃腸道pH梯度的條件下，采用漿法和透析法測(cè)定LMWH pH敏感TCS/O-CMC混合聚合物納米粒的藥物累積釋放度。
　　（5）LMWH pH敏感TCS/O-CMC混合聚合物納米粒大鼠口服生物利用度考察
　　以SD大鼠為研究對(duì)象，采用生色底物法測(cè)定LMWH注射液、LMWH溶液、pH敏

5、感 TCS納米粒和pH敏感 TCS/O-CMC混合聚合物納米粒單劑量給藥后的血藥濃度，并用WinNonlin軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和相對(duì)生物利用度。
　　結(jié)果：
　　（1）以吸收度差值（ΔA）對(duì) LMWH濃度（C）進(jìn)行回歸方程擬合，得到一元三次方程：ΔA=0.3867C3-1.2837C2+1.5597C-0.0586，相關(guān)系數(shù)r=0.9978，在0.102~1.224 IU·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；LMWH在人工胃液中4

6、h后藥物百分含量降為15.21％，在人工腸液中百分含量降為22.74%。
　?。?）所得pH敏感TCS/O-CMC混合聚合物納米粒平均粒徑為(332.0±7.1) nm，PDI(0.279±0.01)，電勢(shì)(28.1±0.24) mV，載藥量(12.04±0.07) IU·mg-1，包封率(96.6±0.72)%；通過透射電鏡觀察納米粒形態(tài)呈類球形、分布均勻。
　?。?）選擇6%葡萄糖+0.5%甘露醇（體積比為2:1）為聯(lián)合

7、凍干保護(hù)劑，與載藥納米粒以1:1（體積）比例混合均勻，冷凍干燥后得到納米粒的平均粒徑為(326.2±4.0) nm， PDI(0.294±0.04)，電勢(shì)(32.3±1.2) mV，透射電鏡觀察納米粒形態(tài)呈橢圓形，分布較為均勻，與凍干前基本保持不變。
　　（4）納米粒在pH1.0、pH6.8及模擬胃腸道梯度pH條件下的24 h累積釋放率依次為：(17.33±0.04)%、(39.25±0.01)%及(34.11±2.51)%。

8、r>　?。?）LMWH溶液、pH敏感TCS納米粒和pH敏感TCS/O-CMC混合聚合物納米粒的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：Cmax分別為(0.103±0.03)、(0.425±0.05)和(0.522±0.04) IU·mL-1。AUC0→∞分別為(0.477±0.35)、(4.710±1.0)和(7.961±2.04) IU·mL-1·h。相對(duì)生物利用度分別為2.10%、20.70%和34.98%（P<0.05）。
　　結(jié)論：
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9、1）天青A-紫外分光光度法準(zhǔn)確可靠、操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，可用于LMWH的體外分析；LMWH在人工胃液、腸液中均不穩(wěn)定，但與在人工胃液中相比，在人工腸液中相對(duì)較穩(wěn)定，與文獻(xiàn)報(bào)道較為相符。
　?。?）由單因素考察、正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LMWH pH敏感 TCS/O-CMC混合聚合物納米粒的制備工藝合理可行。
　?。?）選用甘露醇和葡萄糖作為聯(lián)合凍干保護(hù)劑，使凍干納米粒保持較小的粒徑，同時(shí)具有較理想的外觀形狀。
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