1、低聚果糖具有顯著的營養(yǎng)和保健功能。研究菊粉內(nèi)切酶水解菊粉生產(chǎn)低聚果糖,選育菊粉內(nèi)切酶高產(chǎn)菌株,是功能性低聚糖研究中的熱點課題。
　　 本文的工作內(nèi)容和研究成果主要有以下方面:
　　 ①產(chǎn)菊粉內(nèi)切酶菌株的分離篩選及鑒定:從西北農(nóng)林科技大學(xué)生物園土壤中采樣,以菊粉為底物,松三糖為選擇性鑒別碳源,平板分離純化出6株產(chǎn)菊粉內(nèi)切酶菌株。以酶活I(lǐng)/S值作為復(fù)篩標(biāo)準(zhǔn),篩選出2株產(chǎn)菊粉內(nèi)切酶酶活相對較高的菌株,標(biāo)記為NCM和NSY5,它

2、們的搖瓶初始酶活I(lǐng)/S值分別為17.82,12.40。通過菌落形態(tài)、菌絲及孢子形態(tài)以及生理生化特性分析,初步鑒定命名為:柱隔孢霉Ramularia NCM和克魯維酵母Kluveromyces NSY5。
　　 ②發(fā)酵條件優(yōu)化研究:在單因素實驗基礎(chǔ)上,采用Plackett-Burman實驗設(shè)計對影響Kluveromyces NSY5發(fā)酵產(chǎn)菊粉內(nèi)切酶的碳源、氮源、無機鹽、發(fā)酵時間等8個選擇因素進行評估,結(jié)果顯示培養(yǎng)基的菊芋汁濃度、搖

3、瓶裝液量和發(fā)酵時間對菌株發(fā)酵產(chǎn)酶具有顯著影響。根據(jù)實驗結(jié)果和經(jīng)驗方法對顯著影響因素的優(yōu)化取值范圍進行預(yù)估,用Box-Behnken中心組合實驗和響應(yīng)面尋優(yōu)分析找出顯著影響因素的極優(yōu)值,驗證實驗結(jié)果顯示,采用優(yōu)化的菊芋汁濃度3.5％、裝液量50ml/250ml、發(fā)酵時間56h,Kluveromyces NSY5搖瓶發(fā)酵液中的菊粉內(nèi)切酶I/S值達(dá)到18.29,比初始發(fā)酵條件下的菊粉內(nèi)切酶I/S值12.40提高47.50％,優(yōu)化預(yù)測值和實驗驗