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![敵草隆免疫膠體金快速檢測(cè)試紙條的開發(fā).pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/14/18/b712e0ff-4c0b-4558-b345-206de0ca5b37/b712e0ff-4c0b-4558-b345-206de0ca5b371.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、本論文優(yōu)化建立了敵草隆膠體金免疫層析試紙條的快速檢測(cè)技術(shù),并有效用于水樣中敵草隆的快速篩選。
敵草隆抗血清經(jīng)過(guò)protein A-scpharose4B以及KLH-sepharose4B親和層析純化,得到敵草隆的多克隆抗體,采用檸檬酸三鈉還原法和硼氫化鈉還原法分別制備不同粒徑的膠體金,經(jīng)透射電鏡鑒定粒徑分別為17 nm和6.56 nm,且均勻。將不同粒徑的膠體金分別標(biāo)記多克隆抗體,將敵草隆包被抗原BSA-6C和羊抗兔二抗分
2、別包被在硝酸纖維素膜上作為檢測(cè)線和控制線,優(yōu)化建立了間接競(jìng)爭(zhēng)檢測(cè)方法,即利用敵草隆與固相載體膜上的敵草隆-牛血清白蛋白(Diuron-BSA)偶聯(lián)物(即包被抗原)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合金標(biāo)記抗體,通過(guò)目視可快速定性判斷樣品中敵草隆殘留水平。優(yōu)化后的條件為:抗原包被量為0.24μg,金標(biāo)抗體的稀釋倍數(shù)為1:2,羊抗兔二抗以1:500稀釋。
敵草隆試紙條的方法檢出限為5 ng/mL,選取15種陰性水樣作為檢測(cè)樣品,分別添加5、20、100
3、ng/mL的敵草隆標(biāo)準(zhǔn)品,經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾后直接上樣檢測(cè),經(jīng)試紙條和HPLC檢測(cè),結(jié)果一致性較好,驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確性。
課題進(jìn)一步選擇滅草隆、綠谷隆、氯溴隆、利谷隆、塞苯隆五種敵草隆的結(jié)構(gòu)類似物,考察了它們對(duì)敵草隆試紙條檢測(cè)的干擾。在濃度為1000μg/L時(shí),五種結(jié)構(gòu)類似物對(duì)敵草隆檢測(cè)均無(wú)明顯干擾,說(shuō)明了敵草隆膠體金免疫層析試紙條的高特異性。
論文所開發(fā)的膠體金試紙條無(wú)需檢測(cè)儀器,操作簡(jiǎn)單,快速,1
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