L-組氨酸高產菌株的選育.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了提高L-組氨酸的產量,解決我國L-組氨酸工業(yè)化生產問題,本論文從菌種篩選開始,對篩選到的產生菌進行誘變選育,然后對高產菌株進行發(fā)酵條件的優(yōu)化,旨在獲得性能穩(wěn)定的L-組氨酸高產菌株,具體研究內容和結果如下:
   1.首先對L-組氨酸的測定方法進行了研究,比較了幾種常用測定方法的優(yōu)缺點:紙層析操作簡單,但只能定性測定L-組氨酸,無法準確定量;Pauly比色法快速,準確性較好,對儀器的要求也不高,但干擾因素較多;高效液相色譜法的

2、準確度和靈敏度都很高,但操作比較繁瑣,耗時較長,成本較高。根據實驗的實際要求,最終確定實驗過程中采用多種方法相結合來測定L-組氨酸。
   2.在確定了測定方法之后,實驗從大量搜集到的菌種中篩選L-組氨酸產生菌,對于最初的篩菌工作,采用紙層析法進行定性分析,對初步確定的L-組氨酸產生菌進行復篩,采用Pauly比色法測定,然后對獲得的少量產生菌,采用高效液相色譜法準確測定,最終分離得到了一株產量較高的菌株,為谷氨酸棒桿菌CG4-2

3、,產量為173mg/L,作為下一步育種的出發(fā)菌株。
   3.對出發(fā)菌株CG4-2進行紫外線,氯化鋰和硫酸二乙酯等誘變處理,獲得6-巰基嘌呤抗性、并進一步獲得莽草酸滲漏性營養(yǎng)缺陷型、L-組氨酸酶缺陷型突變株 CG4-2-11-57-40(6-MPR,transketolase-,histidase-),產L-組氨酸的量達到2.18 g/L。通過6次傳代培養(yǎng)并進行搖瓶發(fā)酵實驗,實驗結果表明:6次傳代培養(yǎng)后L-組氨酸的產量變化不大,

4、證明菌株CG4-2-11-57-40具有良好的遺傳穩(wěn)定性。
   4.對獲得的高產菌株進行發(fā)酵條件的優(yōu)化,對各因素分別進行單因素試驗和正交試驗,得到最佳培養(yǎng)基為(g/L):葡萄糖80,硫酸銨35,玉米漿5,KH2PO4 1.5,MgSO4·7H2O 1,碳酸鈣15;最佳培養(yǎng)條件為:最佳發(fā)酵溫度30 ℃,培養(yǎng)基初始pH7.2,裝液量20 mL/250 mL三角瓶,接種量為7.0%,巡回搖床轉速180 r/min,最佳種齡10 h,

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