1、由于食源性血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制肽具有安全性高，無明顯副作用，因而從不同的食品中提取ACE抑制肽成為了國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。從廉價(jià)的食物蛋白源中提取得到ACE抑制活性肽對(duì)于食物蛋白源的綜合利用有著很重要的學(xué)術(shù)和應(yīng)用價(jià)值。本文對(duì)通過文獻(xiàn)收集整理的140個(gè)ACE抑制三肽和z—scales描述值結(jié)合進(jìn)行定量構(gòu)效關(guān)系研究，建立了三肽ACE抑制活性預(yù)測模型，用已知的三肽抑制活性值對(duì)模型進(jìn)行了檢驗(yàn)。模擬人體消化酶系統(tǒng)，采用網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)對(duì)多種食物蛋白

2、進(jìn)行虛擬水解，收集整理得到的三肽，根據(jù)定量構(gòu)效關(guān)系建立的活性預(yù)測模型計(jì)算了這些三肽的ACE抑制活性，篩選出活性較高的三肽進(jìn)行化學(xué)合成。測定合成肽的ACE抑制活性，與預(yù)測的活性對(duì)比，以期對(duì)活性預(yù)測模型做進(jìn)一步的修正。為了探討抑制機(jī)理，對(duì)活性最高的三肽做了抑制動(dòng)力學(xué)研究，同時(shí)用高效液相色譜法(HPLC)驗(yàn)證了這個(gè)肽在食物蛋白水解液中確實(shí)存在。 本課題主要研究有以下幾個(gè)方面： 食物蛋白源的ACE抑制三肽定量構(gòu)效關(guān)系的建立：篩選

3、了140個(gè)已知其抑制活性的三肽，確定其已知的IC50值為自變量，采用z—scales描述值為因變量，進(jìn)行分析，通過偏最小二乘法建立三肽定量構(gòu)效模型，并采用已知抑制ACE活性的三肽進(jìn)行檢驗(yàn)。 食源性三肽庫的建立：總結(jié)了多種食物蛋白質(zhì)，采用網(wǎng)絡(luò)軟件虛擬水解這些食物蛋白質(zhì)，篩選出三肽，并根據(jù)(1)所構(gòu)建出的QSAR模型預(yù)測其IC50值。 具有高ACE抑制活性三肽的合成：根據(jù)模型預(yù)測的IC50值，選取活性較高的三肽化學(xué)合成，然后

4、測定其實(shí)際IC50值。對(duì)實(shí)際測定抑制活性最高的三肽做抑制動(dòng)力學(xué)研究，以便了解其抑制機(jī)理，同時(shí)評(píng)估這個(gè)三肽體外抗消化酶水解的能力。 用合成的三肽為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用HPLC法在食物蛋白質(zhì)水解物中尋找該種ACE抑制三肽，來驗(yàn)證其是否存在于水解液中。 通過實(shí)驗(yàn)研究獲得了以下結(jié)果和結(jié)論：QSAR模型：回歸方程y=1.727584+0.060348x1+0.055900x2+0.106603x3-0.041317x4-0.060064x

5、5+0.151157x6+0.070841x7-0.145287xs-0.071214x9，N=140，R=0.7403，而交互檢驗(yàn)(cross validation，CV)系數(shù)為0.5472，Rcv2＞0.5，說明相應(yīng)變量建立的模型具有較好的預(yù)測能力。QSAR研究結(jié)果表明，ACE抑制三肽C末端起第三位氨基酸殘基的立體性狀大小指數(shù)Z2(x8)對(duì)活性的影響最大，與三肽的ACE抑制活性呈負(fù)相關(guān)，當(dāng)該位氨基酸殘基的立體形狀小而疏水性大時(shí)，滿足

6、這些條件的氨基酸主要為Phe、Trp、Leu、Ile、Val等氨基酸。第二影響因素是C端起第二位氨基酸的電性參數(shù)Z3(x6)，電性參數(shù)越大，活性越強(qiáng)，如Ala、Gly、Lys和Val等氨基酸。C端氨基酸，主要決定于疏水性和側(cè)鏈的體積，疏水性和側(cè)鏈氨基酸體積大的氨基酸有利于提高三肽的活性。 以胃蛋白酶和胰蛋白酶為水解酶，虛擬水解多種食源性蛋白為多肽，篩選出的三肽，計(jì)算出預(yù)測值，并篩選出了IRL、VVF和LRL三個(gè)抑制活性高的三肽，

7、其對(duì)應(yīng)的IC50預(yù)測值分別為2.44μmol/L、6.09μmol/L、2.79μmol/L。而實(shí)際測定這三個(gè)肽的IC50分別為20.3μmol/L，14.36μmol/L，和3.42μmol/L，其中LRL實(shí)際測定值和預(yù)測值非常接近。 抑制動(dòng)力學(xué)研究表明，LRL對(duì)ACE的抑制屬于競爭性抑制。即LRL結(jié)合在ACE的活性中心，其抑制常數(shù)Ki為2.81μmol/L。在體外用胃蛋白酶和胰蛋白酶處理后的LRL抑制活性分別為96.18％和