1、背景:吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)是肝臟外唯一負(fù)責(zé)色氨酸代謝的限速酶,它可以降解必需氨基酸色氨酸并且生成一系列代謝產(chǎn)物。IDO活性的異常引起神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)異常,參與神經(jīng)精神類疾病的發(fā)生。色氨酸代謝除了對免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用,還能影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。IDO能夠改變血清素的前體色氨酸進入犬尿氨酸代謝,導(dǎo)致一系列有毒代謝產(chǎn)物的生成。促炎性細(xì)胞因子可以激活I(lǐng)DO,進而激活色氨酸—犬尿氨酸途徑,在CNS中,95％的色氨酸都是通過犬尿氨酸途徑

2、進行代謝。
　　腫瘤壞死因子-α(TNF-α),干擾素-gamma(IFN-γ)和白介素-1β(IL-1β)等促炎性細(xì)胞因子以協(xié)同作用方式增強IDO活性和色氨酸代謝。而抗炎細(xì)胞因子白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10)抑制T細(xì)胞、樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中IDO介導(dǎo)的色氨酸分解代謝。但在CNS中,抗炎細(xì)胞因子對IDO的影響是不一致的。在神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中,IL-10通過調(diào)節(jié)IDO表達可能提供保護作用,而抗炎細(xì)胞因子IL-4和白

3、介素-13(IL-13)極大地增強了小膠質(zhì)細(xì)胞中IDO的表達。
　　目的:IL-10作為典型的抗炎細(xì)胞因子,不僅抑制炎癥反應(yīng),也有神經(jīng)保護功能,但是深層的機制并不清楚,是否IL-10通過調(diào)節(jié)色氨酸—犬尿氨酸途徑而發(fā)揮功能以及星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL-10對IDO的作用仍待進一步研究。為了解決這個問題,本研究旨在探究在CNS中,是否IL-10在IDO-色氨酸代謝途徑中作為一個潛在的調(diào)節(jié)介質(zhì)發(fā)揮作用。
　　方法:(1)取出生3天內(nèi)的C

4、57乳鼠大腦皮層,通過組織消化法所得星形膠質(zhì)細(xì)胞,進行形態(tài)學(xué)觀察、純度鑒定。
　　(2)采用星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)方法,根據(jù)不同的處理,將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分為四組:即a)空白對照組,b)IFN-γ處理組,c)IFN-γ+IL-10處理組,d)IL-10處理組。用免疫熒光染色(IF)、實時定量PCR(RT-PCR)、免疫蛋白印記(Westernblot)方法來定量檢測IDO的表達量變化。
　　(3)利用免疫蛋白印記的方法檢測信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與

5、轉(zhuǎn)錄激活因子-3(STAT-3)磷酸化及下游細(xì)胞因子信號抑制因子(SOCS3)表達與IDO表達的相互作用,及其信號通路機制。并應(yīng)用STAT-3抑制劑WP1066,探究IL-10發(fā)揮作用的分子機制,以便研究課題進一步深入。
　　結(jié)果:實驗結(jié)果表明：
　　(1)通過機械振搖法得到的原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度、存活率均達到95％以上,明顯看出細(xì)胞分支明顯,胞體伸展。
　　(2)免疫熒光染、RT-PCR、western blo

6、t方法均顯示,IFN-γ+IL-10處理組中IDO表達量顯著低于IFN-γ處理組(P<0.05)。
　　(3)免疫熒光及Western blot結(jié)果顯示,IL-10顯著增強STAT-3磷酸化與SOCS3的表達(P<0.05),明顯抑制酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)表達(P<0.05)。應(yīng)用STAT-3抑制劑WP1066后,顯著降低IL-10對IDO表達的抑制作用,揭示了IL-10抑制IDO表達的分子機制。
　　結(jié)論:(1)在原

7、代星形膠質(zhì)細(xì)胞中,IL-10明顯減少IFN-γ誘導(dǎo)的IDO增多。
　　(2)IL-10通過抑制JAK/STAT-1活性發(fā)揮這種作用。
　　(3)STAT-3,SOCS3,JAK的活性表達是IL-10抑制IDO表達的內(nèi)部信號通路。
　　(4)在CNS疾病中,IDO表達并具有重要作用,探究IL-10對促炎性細(xì)胞因子IFN-γ引發(fā)的IDO表達的影響,可為在CNS中IL-10的神經(jīng)保護作用提供理論依據(jù)與支撐,并為臨床CNS疾病