重組大腸桿菌生物合成白藜蘆醇的條件研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、白藜蘆醇(Resveratro1)是許多植物受到真菌感染、紫外照射或病理狀況下產(chǎn)生的一種植物抗毒素。具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌消炎、免疫調節(jié)等功效,不僅如此,研究表明,白藜蘆醇還具有延年益壽的功能??蓮V泛應用于藥物、保健食品和護膚品等領域,市場需求巨大,目前主要由虎杖花生等植物提取,產(chǎn)品產(chǎn)品純度較差,多以粗產(chǎn)品使用或出口,產(chǎn)品附加值較低。也可以化學合成但各種方法存在合成線路長、生產(chǎn)成本高、環(huán)境污染嚴重等問題,因此植物提取和化學合成無法規(guī)模

2、化生產(chǎn)。目前國外通過將影響白藜蘆醇生產(chǎn)的兩種酶STS(茋合酶)和4CL(香豆酰連接酶)導入大腸桿菌和酵母菌中,添加代謝前體底物對香豆酸經(jīng)過微生物代謝生成白藜蘆醇。
  本研究采用通過基因工程技術將STS和4CL基因導入得到的重組大腸桿菌,所使用的質粒攜帶大腸桿菌組成型強啟動子,無需誘導劑的加入,保證了酶的表達和安全性。通過質粒提取以及PCR測序等操作來確定工程菌的準確性以及其質粒穩(wěn)定性的測定。隨后對大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)白藜蘆醇過程中發(fā)

3、酵培養(yǎng)基和轉化條件進行了優(yōu)化,通過單因素實驗確定了轉化培養(yǎng)基中最優(yōu)培養(yǎng)基是 YM9培養(yǎng)基。最優(yōu)培養(yǎng)條件如下:最適培養(yǎng)溫度為37℃,搖床轉速200r/min,培養(yǎng)基初始pH為7.0,最適底物添加方式為重懸后添加,最適底物添加濃度1.2g/L,最適重懸時間重懸前培養(yǎng)10h。實驗過程中建立了白藜蘆醇的液相檢測體系:C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流動相:乙腈:水=40:60(0.1%乙酸),VVD306nm,流速0.5mL/min

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