1、醬油中的主要風味物質大都是由發(fā)酵過程中添加的酵母產生，但是在醬油高鹽稀態(tài)發(fā)酵中鹽的濃度高達17％，致使酵母的代謝活性明顯降低，這嚴重影響風味物質的形成，導致醬油質量下降。因此，本實驗室應用基因組重排技術，以野生型T酵母為出發(fā)菌株構建了耐鹽的優(yōu)良酵母菌株T3-5。此外，因為目前對T酵母的基因組序列處于未知狀態(tài)，而且對于T酵母和T3-5耐鹽機制還不清楚。所以本文對T酵母(Torulopsisversatilis)和T3-5的耐鹽基因HOG1

2、進行研究，即在基因轉錄水平、基因的過量表達、DNA序列及蛋白質結構等分子水平上進行多角度的分析及比對，從而為闡明T酵母的耐鹽機制奠定良好基礎。
　　 本文通過半定量PCR(RT-PCR)對T酵母和T3-5在不同鹽濃度下耐鹽基因HOG1的RNA表達量進行了分析，研究發(fā)現(xiàn)，T3-5的HOG1表達量明顯高于T酵母;繼而對T酵母和T3-5的HOG1進行克隆測序，即分別將其PCR產物插入到測序載體pUC19中，構建質粒pUC19-T和pU

3、C19-T5，測序結果發(fā)現(xiàn)T3-5的HOG1的堿基發(fā)生了突變;而后將測序結果翻譯成氨基酸，并經NCBI比對，整理拼接后進行蛋白質的二級、三級結構預測，分析發(fā)現(xiàn)T和T3-5之間有兩個明顯的氨基酸差異，同時T3-5的蛋白等電點高于T酵母;最后，分別將T酵母和T3-5的HOG1目的基因片段插入到YEp195表達載體中，隨后將所構建的質粒YEp195-T和YEp195-T3-5分別轉入釀酒酵母實驗室菌株W303-1A中，并對所構建的工程菌株進行