1、晝夜節(jié)律是機(jī)體調(diào)節(jié)自身生理活動(dòng)和行為來(lái)適應(yīng)環(huán)境的近24小時(shí)的周期性變化。晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)方式是由正調(diào)控元件和負(fù)調(diào)控元件組成的轉(zhuǎn)錄/翻譯負(fù)反饋環(huán)路。除此之外，晝夜節(jié)律還受到其他許多因素調(diào)控，其中最重要的一個(gè)因素就是能量代謝，但是能量代謝影響晝夜節(jié)律的分子機(jī)制尚不清楚。我們通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)篩選發(fā)現(xiàn)LIPIN1與BMAL1分子之間存在相互作用。LIPIN1蛋白參與脂質(zhì)合成和能量代謝。本研究擬進(jìn)一步研究LIPIN1在晝夜節(jié)律和能量代謝中的作用，

2、探討能量代謝影響晝夜節(jié)律的可能通路。
　　目的:闡明LIPIN1在晝夜節(jié)律中的作用;研究LIPIN1是否介導(dǎo)了能量代謝對(duì)晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)。
　　方法:通過(guò)免疫沉淀驗(yàn)證LIPIN1和BMAL1的相互作用;通過(guò)GSTpull down的方法尋找LIPIN1與BMAL1，CLOCK相互作用的結(jié)合域;通過(guò)熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)研究LIPIN1對(duì)BMAL1，CLOCK的功能的影響;通過(guò)構(gòu)建LIPIN1的突變體，檢測(cè)螢光素酶活性，尋找LIPIN

3、1對(duì)BMAL1，CLOCK的功能影響的結(jié)構(gòu)域;通過(guò)免疫熒光共定位尋找LIPIN1在細(xì)胞中發(fā)揮影響B(tài)MAL1，CLOCK功能的可能性原因的解釋。通過(guò)LIPIN1基因敲除小鼠的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，研究LIPIN1對(duì)晝夜節(jié)律的作用;通過(guò)實(shí)時(shí)定量熒光PCR研究LIPIN1敲除后對(duì)時(shí)鐘基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:LIPIN1與BMAL1、CLOCK之間存在相互作用， LIPIN1b的C端是其與BMAL1、CLOCK相互作用的重要結(jié)構(gòu)域。在小鼠肝臟中

4、，LIPIN1與BMAL1的相互作用具有晝夜節(jié)律性，在CT8-CT16最高。LIPIN1可以劑量依賴(lài)性地抑制CLOCK/BMAL1的轉(zhuǎn)錄活性。其可能的作用機(jī)制是促進(jìn)BMAL1從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)中。LIPIN1基因敲除小鼠肝臟中一些CLOCK/BMAL1靶基因表達(dá)的晝夜節(jié)律出現(xiàn)變化，主要表現(xiàn)為CT9的表達(dá)量比野生型小鼠高。白天進(jìn)食可以逐步逆轉(zhuǎn)小鼠肝臟的節(jié)律基因表達(dá)，而這種改變?cè)贚IPIN1基因敲除小鼠中變緩。LIPIN1在果蠅神經(jīng)系統(tǒng)的