Bacillus subtilis natto纖溶酶基因工程研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本試驗利用氯化芐法提取了畢赤酵母GS115、大腸桿菌JM109、無花果曲霉AS3.324和亞心型扁藻的基因組DNA,結果表明提取出的基因組DNA可以用于進一步的基因工程操作,證明氯化芐法是一種普適的基因組DNA提取方法.然后利用氯化芐法從納豆枯草桿菌(As1.1086)中提取出基因組DNA,PCR擴增出納豆激酶基因(NK),構建克隆載體,將該基因克隆到克隆載體pMD18-T上,獲得重組質粒pMD18-T/NK,其測序結果表明:NK基因由

2、831個核苷酸組成,編碼276個氨基酸,其中不含內含子.將pMD18-T/NK以及表達質粒pPIC9K分別用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ雙酶切,連接獲得重組載體pPIC9K/NK并將其轉化至巴斯德畢赤酵母GS115中.納豆激酶基因組DNA轉入畢赤酵母GS115表達后,進行了發(fā)酵條件的優(yōu)化.考察了無機氮源培養(yǎng)基在酵母發(fā)酵中的應用,無機氮源選擇了(NH<,4>)<,2>SO<,4>和NH<,4>NO<,3>,并與常用的有機氮源培養(yǎng)基進行了對比,

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